[发明专利]携带幽门螺杆菌的重组流感病毒、宿主细胞及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒，其特征在于：

所述重组流感病毒为甲型流感病毒；

所述重组流感病毒的载体为A型流感病毒A/WSN/33或A/PR/8/34；

所述重组流感病毒通过流感病毒反向遗传系统在细胞中拯救出携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒；所述重组流感病毒在MDCK细胞、A549细胞、VERO细胞或鸡胚中进行传代和扩增；

所述幽门螺杆菌基因片段位于经改造甲型流感病毒NS片段上；所述重组流感病毒中幽门螺杆菌基因来源为幽门螺杆菌鼠适应株；

所述幽门螺杆菌基因为Ure A/B亚单位优势抗原表位，其编码基因序列如SEQ ID NO：1所示，已于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号：CCTCC NO:V202011。

2.根据权利要求1所述的携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒，其特征在于：所述幽门螺杆菌基因为Ure A/B亚单位、NapA、Lpp20、HpaA联合优势抗原表位，其编码基因序列如SEQID NO：2所示，已于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号：CCTCC NO:V202012。

3.一种如权利要求1或2所述携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为293T、COS细胞或293T和MDCK、COS和MDCK共培养细胞系；所述重组流感病毒在9-11日龄鸡胚、MDCK、Vero、A549细胞中稳定传代。

4.一种制备如权利要求1或2所述携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒的方法，其特征在于：包含如下步骤：

（1）将甲型流感病毒NS片段中RNA剪接位点进行同义点突变；在此基础上通过基因合成手段合成NS1和NS2两端序列；将幽门螺杆菌基因通过自剪接肽段连接于NS1片段后，NS2片段前，形成了5’-3’方向分别为NS1、自剪接肽段、幽门螺杆菌基因、自剪接肽段、NS2的重组NS质粒；其中每段基因的的开放阅读框均保持一致；

（2）将步骤（1）中的重组NS质粒与剩余野生型质粒转染宿主细胞进行拯救重组病毒；

所述外源片段为幽门螺杆菌的保护性抗原及优势表位；或者所述外源片段是尿素酶A和B的全基因或优势表位、或NapA的全基因或优势表位、或Lpp20的全基因或优势表位、或HpaA的全基因或优势表位；或者也是以上多种蛋白的优势表位。

5.一种如权利要求1或2所述携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒在制备幽门螺杆菌疫苗中的应用，其特征在于：所述幽门螺杆菌疫苗为单基因、多价嵌合疫苗；所述重组流感病毒用通用技术加工可供临床用的制剂，所述制剂为液体制剂、冻干制剂、胶囊制剂、片剂或丸剂中的任一种。

6.根据权利要求5所述携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒在制备幽门螺杆菌疫苗中的应用，其特征在于：所述疫苗的接种途径为肌肉注射、皮下注射、口服，或者为鼻腔、口腔、肛门和阴道粘膜途径。

7.一种如权利要求1或2所述携带幽门螺杆菌基因的重组流感病毒在利用鸡胚作为生物反应器生产幽门螺杆菌蛋白中的应用。