[发明专利]一种强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法

权利要求书

1.一种强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)采用pH＝4～5的缓冲液1在适宜水压下将微生物从附着基质上洗脱，离心收集菌体样品；

2)采用含有EDTA的pH＝7～7.5的缓冲液2进行洗涤、离心收集菌体样品；

3)将步骤2)收集的菌体样品进行DNA提取。

2.根据权利要求1所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述适宜水压为30～120MPa。

3.根据权利要求1或2所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述缓冲液2中含有的EDTA的摩尔浓度为50～100mM。

4.根据权利要求3所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述缓冲液2为PBS-Tris缓冲溶液，所述缓冲溶液中含有摩尔浓度为50～100mM的Tris-HCl溶液。

5.根据权利要求3所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述步骤1)中洗脱时冲洗不超过90秒。

6.根据权利要求4所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述缓冲液1包括pH＝4～5的等渗缓冲液或以微生物所处环境液体中其他化学成分复配并用硫酸调节酸性至pH＝4～5的模拟溶液。

7.根据权利要求1或2所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述步骤1)和步骤2)中离心收集菌体样品的条件为：速度为5000～6000g，离心时间2～5分钟，离心温度4℃。

8.根据权利要求3所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述的步骤3)中提取总DNA的方法包括冻融法或超声法。

9.根据权利要求8所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述缓冲液1包括磷酸缓冲液或磷酸-磷酸二氢钾缓冲液，所述缓冲液1使用体积为50～100mL。

10.根据权利要求9所述的强酸性条件下基质附着生物膜中微生物总DNA的提取方法，其特征在于：所述强酸性条件为pH值2的条件。