[发明专利]一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法

权利要求书

1.一种宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.病原体富集：在1.5mL第一离心管中加入样本，于室温条件下离心5-10min，除去上清液；

S2.宿主细胞裂解：在第一离心管中加入200-1000μL裂解缓冲液Buffer G1，在20-40℃条件下孵育10-30min；

S3.宿主DNA去除：第一离心管于室温条件下离心2-5min，除去上清液，向第一离心管中再次加入200-500μL裂解缓冲液Buffer G1和1-3μL全能核酸酶，30-40℃孵育10-30min，10000-12000rpm离心2-5min，除去上清液，加入500-1000μL Buffer G1清洗沉淀，10000-12000rpm离心2-5min，除去上清液，重复清洗步骤一次；

S4.微生物菌体破壁：加入100-300μL溶菌酶重悬沉淀后将重悬液转移到装有玻璃珠的裂解管中，将裂解管置于30-40℃孵育10-30min，涡旋混匀处理5-10min；

S5.微生物裂解和核酸提取：将样品瞬时离心后加入10-40μL蛋白酶K和200-500μL裂解缓冲液Buffer GL，涡旋混匀后于50-65℃孵育10-30min，12000rpm离心1min，吸取上清至第二离心管中，向第二离心管中加入200μL无水乙醇，涡旋混匀后将溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1min，除去收集管中的液体，将吸附柱重新放回至该收集管中，向吸附柱中加入500μL清洗液Buffer GW1，12000rpm离心1min，除去收集管中的液体，将吸附柱重新放回至该收集管中，向吸附柱中加入500μL清洗液Buffer GW2，12000rpm离心1min，除去收集管中的液体，将吸附柱重新放回至该收集管中，12000rpm离心2min后，除去收集管中的液体，将吸附柱置于室温条件下彻底晾干后放入第三离心管中，向吸附柱中加入50μL Buffer GE，室温放置5min，12000rpm离心1min，收集DNA溶液于-20℃条件下保存。

2.根据权利要求1所述的宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S2中裂解缓冲液Buffer G1包括5mM Tris-HCl、3mM MgCl₂，1％Triton X-100，1％(w/v)SDS，10mM DTT和10mM HEPS-KOH，裂解缓冲液Buffer G1的pH值为8.0。

3.根据权利要求2所述的宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S3中的全能核酸酶的浓度为200-250U/μL。

4.根据权利要求3所述的宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S4中裂解管置于30-40℃孵育10-30min后，可于恒温混匀仪上2500-2900rpm处理5-10min。

5.根据权利要求4所述的宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S5中裂解缓冲液Buffer GL包含Tris-HCl、氯化钠、异硫氰酸胍、SDS和TritonX-100。

6.根据权利要求5所述的宏基因组样本去宿主化提取试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S5中样品与蛋白酶K的体积比为5：1-20：1，蛋白酶K的酶活浓度范围为10mg/mL-30mg/mL。