[发明专利]一种快速检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法

说明书

本发明提供了一种快速检测甲壳素中蛋白质的方法，属于蛋白质检测技术领域。检测方法包括如下步骤：（1）称取样品，加入0.5mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液1；（2）收集残渣加入0.3mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液2；（3）收集残渣加入0.2mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液3；（4）将三次收集液分别吸取1mL于10mL样品比色管中，另分别吸取浓度为100μg/mL的蛋白质标准溶液0 mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL于6支10mL标准比色管中，向6支标准比色管加入1%NaCl溶液1mL、0.9 mL、0.8 mL、0.6 mL、0.2 mL、0 mL，使其体积为1.0mL,于标准比色管和样品比色管中加入考马斯亮蓝G250溶液5.0 mL,混匀，静置10min后于595nm处测定其吸光度。（5）通过计算公式，计算得到总的蛋白质含量。

技术领域

本发明属于蛋白质检测技术领域，尤其涉及一种快速检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法。

背景技术

甲壳素(C8H13O5N)n，又称甲壳质，英文名Chitin.是主要存在于甲壳类动物外壳中的一种功能性物质，经工艺提取，产品为白色片状物质，甲壳素无臭、无味，不溶于水、稀酸、稀碱及其它有机溶剂。

目前，甲壳素主要用于生产壳聚糖的原料，壳聚糖普遍应用于医药、美容、工业等领域。作为一种现代保健食品，壳聚糖具有增加免疫力、护肝解毒等功效。随着甲壳素向高科技产业的发展，甲壳素工艺中蛋白质的残留含量已作为甲壳素质量的一个主要指标。在生产甲壳质的工艺中，需要用稀盐酸溶液脱去碳酸钙，然后用稀氢氧化钠溶液洗脱去蛋白质，在工业生产中，甲壳素产品中蛋白质难以完全脱除，且甲壳素不溶于水，难以直接测定其蛋白质含量及变化。目前测定蛋白质含量的方法主要有福林酚试剂法、紫外分光光度法和考马斯亮蓝G-250法，福林酚试剂法操作要求严格计时耗费时间常，灵敏度不高，且蛋白质之间的变动大、干扰物较多，如硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、各种硫醇对检测结果的准确性有较大影响。紫外分光光度法无样品损耗，但是干扰物质也比较多，如各种核苷酸。因此，目前，尚无一种高效的检测甲壳素中蛋白质含量的方法。

发明内容

本发明的目的提供一种能够快速且准确检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种快速检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)样品前处理

A.称取甲壳素样品，加入0.5mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h；

B.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液1转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+5)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

C.将残渣1收集至锥形瓶中，加入0.3mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h；

D.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液2转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+7)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

E.将残渣2收集至锥形瓶中，加入0.2mol/L NaOH溶液，70℃水浴1h；

F.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液3转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+7)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

(2)样品检测

A.将收集液1，收集液2和收集液3分别吸取1mL于10mL样品比色管中；

B.分别吸取100μg/mL的蛋白质标准溶液0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、 0.8mL、1.0mL于6支10mL标准比色管中；