[发明专利]一种快速检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法

权利要求书

1.一种快速检测甲壳素样品中蛋白质含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)样品前处理

A.称取甲壳素样品，加入0.5mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h；

B.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液1转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+5)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

C.将残渣1收集至锥形瓶中，加入0.3mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h；

D.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液2转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+7)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

E.将残渣2收集至锥形瓶中，加入0.2mol/L NaOH溶液，70℃水浴1h；

F.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液3转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用(1+7)Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；

(2)样品检测

A.将收集液1，收集液2和收集液3分别吸取1mL于10mL样品比色管中；

B.分别吸取100μg/mL的蛋白质标准溶液0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL于6支10mL标准比色管中；

C.向6支标准比色管中加入1％Nacl溶液1mL、0.9mL、0.8mL、0.6mL、0.2mL、0mL，使其体积为1mL；

D.于6支标准比色管和3支样品比色管中加入5mL考马斯亮蓝G250溶液，混匀，静置10min后于595nm处测定其吸光度；

E.通过计算公式，计算3支样品的蛋白质含量，合并3次结果得到总的蛋白质含量；

所述计算公式为：

公式中：

X---样品中蛋白质含量；

C---从标准曲线上得到蛋白质溶液浓度；

V1---样品溶液定容体积为100ml；

m---甲壳素样品的质量；

所述甲壳素样品质量与所述0.5mol/L NaOH溶液用量的比值为2g：50mL；

所述甲壳素样品质量与所述0.3mol/L NaOH溶液用量的比值为2g:50mL；

所述甲壳素样品质量与所述0.2mol/L NaOH溶液用量的比值为2g:50mL；

所述考马斯亮蓝G250溶液的配置方法为100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL95％乙醇溶液中，加入180g柠檬酸，20g硼酸，溶解后定容至1L。