[发明专利]一种高效表达PCV2Cap、PCV3Cap融合蛋白的方法有效
| 申请号： | 202010052203.0 | 申请日： | 2020-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN111187353B | 公开（公告）日： | 2021-11-30 |
| 发明（设计）人： | 李俊;王硕;吴晓燕;时建立;彭喆;李琛;徐绍建 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N5/10;G01N33/569;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 安丽艳 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 pcv2cap pcv3cap 融合 蛋白 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种PCV2 Cap、PCV3 Cap融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）通过含目的基因核酸序列的载体转染含杆粒骨架的感受态细胞获得重组杆粒；重组杆粒转染昆虫宿主细胞，获得含重组杆状病毒的上清液；
（2）含重组杆状病毒的上清液接种昆虫宿主细胞，培养后获得上清液；
（3）上清液分离纯化后获得PCV2 Cap、PCV3 Cap融合蛋白；
所述融合蛋白包括截短PCV2 Cap蛋白段、接头序列、PCV3 Cap蛋白段和蜂素信号肽区域；所述截短PCV2 Cap蛋白段为去除核定位信号的PCV2 Cap蛋白；
所述接头序列为疏水柔性肽链；所述接头序列如SEQ ID NO: 1所示；
所述融合蛋白的核酸序列如SEQ ID NO: 2所示；
所述载体为pFastBacTM Dual质粒；
所述感受态细胞为DH10Bac；
所述昆虫宿主细胞为Sf9细胞；
所述接种的接种量为MOI为0.1，昆虫宿主细胞的密度为2.5×106个/mL，培养时间为接种后4天。
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