[发明专利]一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法

说明书

本发明涉及一种药物提取及纯化技术，具体是提供了一种同时高效分离出粉防己甲素与乙素的技术方法；即利用甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁氰等与目标分子粉防己甲素及乙素合成，再洗脱目标分子得到双模板分子印迹聚合物，再利用该聚合物同时提取粉防己中甲素及乙素，再通过反相色谱柱及制备色谱仪进一步分离粉防己甲素及乙素，所得粉防己甲素及乙素纯度均达到99%以上。

技术领域

本发明涉及一种天然药物原料药的提取及纯化技术，具体是涉及一种利用双模板分子印迹同时提纯粉防己中汉防己甲素、汉防己乙素的技术。

背景技术

粉防己，又叫汉防己、白木香，为防己科植物石蟾蜍的根。粉防己甲素又名汉防己甲素，别名粉防己碱、汉防己碱，为抗高血压药，临床上主要用于治疗轻、中度高血压，亦可用于高血压危象。粉防己乙素则具有抗炎镇痛、降压、抗肿瘤作用。

随着人们对粉防己和其中有效成分的认识加深，粉防己甲素和粉防己乙素得到越来越多的应用；目前，主要利用溶剂回流或渗漉的方法提取汉防己甲素和汉防己乙素，然后利用柱层析进一步纯化，达到药用纯度；但这种方法需要大量的有机溶剂做流动相，而且有机溶剂回收成本高，而且反相吸附填料对粗浸膏吸附量小、目标成分损耗高，吸附填料重复利用率低，需要经常更换，不经济不环保；且粉防己药材中，化学成分复杂，在汉防己碱类成分的提取物中，常伴随着诸如糖类、鞣质等亲水性较强的植物成分以及其他极性相近的小分子化合物，给汉防己碱类成分的分离纯化增加了难度，分离后的汉防己甲素和汉防己乙素的纯度低，无法满足医药行业（纯度达到99%以上）的要求，限制了汉防己甲素及汉防己乙素的应用。

分子印迹技术是用于识别特定目标分子的技术 , 分子印迹聚合物首先由模板分子与可聚合的功能单体通过静电作用、范德华力、疏水作用和氢键等非共价键或共价键作用形成主客体配合物 ,加入引发剂和交联剂进行聚合反应,制得高分子聚合物,然后利用化学或物理方法除去模板分子；目前单分子印迹作为固相萃取技术，已有相应的技术报道，通过该方法进行提取，目标分子单一，提纯度高。

然而，由于汉防己甲素与乙素具有相似的结构特性，在应用单分子印迹提纯过程中，无法避免的会有相互组分的穿插，导致单分子印迹提纯后依然要进一步提纯，使得提纯步骤更为繁琐，限制了分子印迹在粉防己中提纯甲素及乙素的应用。

为此，发明人提出建立粉防己中甲素及乙素双模板分子印迹聚合物，对甲素及乙素同时富集，可以提取高纯度的甲素及乙素混合物，有效降低其他类似物的干扰，再应用反相柱色谱进一步纯化甲素及乙素，有效避免单独提取过程中两种组分的穿插，提高了收率。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种汉防己甲素与乙素的双模板分子印迹聚合物的制备方法。

本发明的第二目的是提供一种结合上述双模板分子印迹聚合物及反相柱色谱提纯汉防己甲素及乙素的方法。

本发明具体内容如下：

一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，包含以下步骤：

1）双模板分子印迹聚合物的制备：称取汉防己甲素与乙素，与甲基丙烯酸混合，置于具塞锥形瓶中，以体积比1:1-5的甲苯和乙腈混合溶剂溶解，密封，于震荡器中震荡1-4h，使充分反应；加入二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁氰，充分摇匀，将溶液转入玻璃安培瓶，通氮气5-20min脱氧气；40-60℃恒温水浴反应30-48h；生成的聚合物过滤除去溶剂，冷却至室温，研碎，过50-100目筛；将过筛后的聚合物装柱，用50%-80%乙醇水溶液洗脱模板分子和未反应或者过剩的功能单体，洗脱流速为1-4ml/min,高效液相色谱法检测至无汉防己甲素与乙素；于真空干燥箱中40-60 ℃烘干，18-24h，得双模板分子印迹聚合物；