[发明专利]一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法

权利要求书

1.一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，其特征在于：包含以下步骤：

1）双模板分子印迹聚合物的制备：称取汉防己甲素与乙素，与甲基丙烯酸混合，置于具塞锥形瓶中，以体积比1:1-5的甲苯和乙腈混合溶剂溶解，密封，于震荡器中震荡1-4h，使充分反应；加入二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁氰，充分摇匀，将溶液转入玻璃安培瓶，通氮气5-20min脱氧气；40-60℃恒温水浴反应30-48h；生成的聚合物过滤除去溶剂，冷却至室温，研碎，过50-100目筛；将过筛后的聚合物装柱，用50%-80%乙醇水溶液洗脱模板分子和未反应或者过剩的功能单体，洗脱流速为1-4ml/min,高效液相色谱法检测直至无汉防己甲素与乙素；于真空干燥箱中40-60℃烘干18-24h，得双模板分子印迹聚合物；

2）汉防己甲素与乙素的提取：粉防己药材粉碎，以6-10倍体积的70-90%乙醇回流提取3-5次，每次2-5h，合并提取液，滤过，得浸膏，分散于4倍体积水中，过滤，收集滤液，并调节pH为7-9，将滤液与双模板分子印迹聚合物混合，静置2-18h；装柱，用体积比1:1-5的二氯甲烷与甲醇混合溶剂洗脱，按1-4ml/min流速，淋洗固相萃取；直至淋洗液中未有汉防己甲素与乙素检出；

3）汉防己甲素与乙素的收集：以紫外-可见分光光度法检测，收集含有汉防己甲素与乙素的洗脱溶液，回收溶剂；浓缩得汉防己甲素与汉防己乙素粗提取物；

4）汉防己甲素与乙素进一步纯化：将上述收集的粗提取物用20%-30%乙醇溶解，应用反相色谱柱进一步纯化，得汉防己甲素与乙素；

所述步骤1）中汉防己甲素、汉防己乙素、甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁氰按摩尔比为1:1：3-5:15-25:10-15；

所述步骤4）反相色谱柱进一步纯化中，所用反相C18填料的量为步骤3）中粗提取质量的200-300倍。

2.根据权利要求1所述的一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，其特征在于：所述步骤2）中滤液与双模板分子印迹聚合物按10ml：2-5mg比例混合。

3.根据权利要求1所述的一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，其特征在于：所述步骤4）反相色谱柱进一步纯化中，上样体积为柱体积的1%-5%。

4.根据权利要求1所述的一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，其特征在于：所述步骤4）反相色谱柱进一步纯化中，洗脱程序为20%-30%乙醇洗脱4-8BV，50%-60%乙醇洗脱4-8BV，70%-90%乙醇洗脱4-8BV。

5.根据权利要求1所述的一种粉防己中甲、乙素双模板分子印迹提纯方法，其特征在于：所述步骤4）反相色谱柱进一步纯化中，洗脱液按照紫外光谱收集。