[发明专利]一种基于制片法的液基真菌检测方法

说明书

本发明提出了一种基于制片法的液基真菌检测方法，属于医疗检测技术领域，具体包括以下步骤：S1.取样；S2.样品处理；S3.样品制片；S4.样品检测。本发明采用液基真菌富集制片法，提高真菌细胞的显现度，提高对真菌细胞的观察效率，可以简便快捷的实现在待检测样品中过滤杂质，富集需检测的真菌进行制片，以便于观察和检测，有效的解决了现有技术中所存在的操作繁琐、过程耗时长，所需试剂多等问题。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体涉及一种基于制片法的液基真菌检测方法。

背景技术

真菌属于真核生物，没有质体，营养方式为吸收，无吞噬作用。细胞壁含有甲壳质和β-葡聚糖。可引起人类，动物的疾病，称为真菌病，还可引起植物的疾病、人类过敏性疾病和真菌毒素中毒症。真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件。近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。

真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。

液基细胞学技术，对脱落细胞学制片最有效，在宫颈癌早期筛查中应用较广，而在基层医院用于非妇科标本的制备，尚在摸索起步阶段，在非妇科的应用其效果褒贬不一。与传统涂片相比，其优点为：(1)大大减少了传统涂片中的黏液、血液，背景较干净，涂片厚薄均匀，细胞平铺，易于观察；(2)液基为湿固定因而细胞保存完好，结构清晰，细胞退变较少；(3)易于重复制片，同时保存了细胞的抗原性，易于进行免疫组化的检测。

发明内容

本发明提供一种基于制片法的液基真菌检测方法，其目的在于，提高真菌细胞的显现度，提高对真菌细胞的观察效率，可以简便快捷的实现在待检测样品中过滤杂质，富集需检测的真菌进行制片，以便于观察和检测，有效的解决了现有技术中所存在的操作繁琐、过程耗时长，所需试剂多等问题。

本发明提供一种基于制片法的液基真菌检测方法，包括以下步骤：

S1.取样：由妇科医生用一次性采样拭子采集标本，立即放入装有保存液的标本瓶,折断模塑点并丢弃手柄拧紧瓶盖，适当振荡瓶子，以进一步充分释放样品中细胞及微生物，使样品充分接触保存液；

S2.样品处理：往样品液瓶里添加等体积前处理液，拧紧瓶盖，适当振荡瓶子，使样品充分接触前处理液；

S3.样品制片：样品混合均匀后，用制片设备进行制片；制片结束后，取出载玻片，制片完成后观察，若制片中央无空心，置于空气中晾至湿干，在95％乙醇中固定5min；

S4.样品检测：在载玻片上滴加50ul荧光染色液，盖上盖玻片后静置数十秒后置于荧光显微镜下镜检；

其中，所述荧光染色液由以下原料按重量份制备而成：苯酚5份、乙二醇20份、PBS缓冲液100份、藻红蛋白30份和去离子水100份。

作为本发明进一步的改进，步骤S3中所述样品制片方法包括离心法、膜式法和沉降法。

作为本发明进一步的改进，所述离心法包括以下步骤：利用离心将黏液与真菌细胞相分离，形成均匀的悬浮液，涂片制成单层薄片，整个过程在制片机自动完成。

作为本发明进一步的改进，所述膜式法包括以下步骤：将样品通过过滤膜过滤，使真菌细胞贴附在滤膜上，再通过负压力将滤膜上的真菌细胞转移到载玻片上，放入固定液中固定，整个过程在制片机自动完成。