[发明专利]CTLA-4结合分子及其用途

说明书

本发明涉及特异性CTLA‑4结合分子以及含有所述CTLA‑4结合分子的免疫缀合物、组合物。本发明还涉及编码所述CTLA‑4结合分子的核酸及包含其的宿主细胞，以及制备所述CTLA‑4结合分子的方法。此外，本发明涉及这些CTLA‑4结合分子的治疗和诊断用途。特别地，本发明涉及这些CTLA‑4结合分子与其它疗法，例如治疗方式或治疗剂的联合治疗。

本发明涉及特异性CTLA-4结合分子以及含有所述CTLA-4结合分子的免疫缀合物、组合物。此外，本发明涉及编码所述CTLA-4结合分子的核酸及包含其的宿主细胞，以及制备所述CTLA-4结合分子的方法。本发明还涉及这些CTLA-4结合分子的治疗和诊断用途，特别地，本发明还涉及这些CTLA-4结合分子与其它疗法，例如治疗方式或治疗剂的联合治疗。

背景技术

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4)，又称CD152，是一种白细胞分化抗原。作为免疫球蛋白超家族成员中的一种跨膜蛋白质，主要表达于活化的T淋巴细胞和B细胞表面。

在T细胞表面表达的CTLA-4和T细胞表面的共刺激分子CD28具有高度的同源性，它们拥有相同的配体CD80(B7-1)或CD86(B7-2)，但CTLA-4以比CD28更大的亲和力和亲合力结合CD80和CD86。CTLA-4与CD80(B7-1)或CD86(B7-2)结合后形成的CTLA-4/CD80和/或CTLA-4/CD86复合物负调节T细胞受体信号传导，导致随后的T细胞活化的下调、抗肿瘤免疫活性的抑制和肿瘤的免疫逃逸。CTLA-4在许多癌症组织中过表达，所述癌症包括多种实体瘤，诸如黑色素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌、肝癌、乳腺癌等。活化的T淋巴细胞表面CTLA-4过表达可促进肿瘤侵袭，并且常常与不良预后相关。

单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单克隆抗体(150kD)分子质量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。因此，需要开发新的分子量小的抗体分子。

单结构域抗体(single domain antibody,sdAb)是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10。单结构域抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小、稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性弱、穿透性强、靶向性强、人源化简单，制备成本低廉等，几乎完美克服了传统抗体开发周期长，稳定性较低，保存条件苛刻等缺陷。

目前现有技术中针对CTLA-4靶点的单结构域抗体药物不多，而且这些单结构域抗体药物的治疗效果也不甚理想。因此，本领域迫切需要开发新的包含有效针对CTLA-4的单结构域抗体的CTLA-4结合分子。

发明概述

本发明人通过锐意研究，开发了一组包含特异性识别CTLA-4的单结构域抗体(sdAb)部分的CTLA-4结合分子，其能够

(1)以高亲和力结合CTLA-4，例如人CTLA-4，例如，所述CTLA-4结合分子与CTLA-4之间结合的Kd是约10^-5M至约10^-12M，优选地，约10^-7M至约10^-12M；

(2)有效阻断CTLA-4的相关活性，例如，有效阻断CTLA-4与CD80和/或CD86的结合；

(3)有效诱导IL-2的分泌和TNF-α的分泌；且

(4)使T细胞保持活化状态。

因此，在第一方面，本发明提供了CTLA-4结合分子，其包含至少一个特异性结合CTLA-4的单结构域抗体(sdAb)部分，所述sdAb部分包含三个互补决定区，分别为CDR1、CDR2和CDR3，其中：