[发明专利]一种苹果砧木B9的组培快繁方法

说明书

本发明提供了一种苹果砧木B9的组培快繁方法，取外植体接种于增殖培养基，光照培养诱导形成丛生芽；增殖培养基包括MS培养基、25‑35g/L蔗糖、0.4‑1.0mg/L 6‑BA和0.3‑0.5mg/L NAA，pH5.6‑6.0；培养条件包括：光照时间8‑14h/d，光照强度2500‑3000Lx，培养时间25‑35d；取株高≥2cm的丛生芽接种至无糖生根培养基，在800‑1500ppm二氧化碳浓度下光照培养至完全生根；无糖生根培养基为不含激素、糖和琼脂的1/2MS培养基；培养条件：光照时间10‑12h/d，光照强度不低于3000Lx。上述方法控制玻璃化苗的产生又增强了增殖率，可快速扩繁。

技术领域

本发明涉及组培领域，具体涉及一种苹果砧木B9的组培快繁方法。

背景技术

B9是前苏联米丘林大学选育的抗寒性强的B系砧木中的一个单系，树体较高，树冠较大，果实着色好，矮化效应强，综合形状良好，适宜在渭北及条件形似的黄土高原苹果产区推广应用。能耐-40℃的极端低温，嫁接品种后的树势类似于M9-T337，嫁接后亲和性、早果性好。由于我国苹果生产模式由传统果园模式转变为高密度矮体树机械管理模式，要打造苹果产业强国，苗木选择是基础，苗木的选择直接影响苹果产业的发展，优质的B9苗木，有利于机械管理模式及其推广。

组培快繁是一种新兴的苗木培育方法，可快速获得大量无毒优质苗木，缩短育种周期，提高苗木质量。但由于技术难度较高，目前尚未获得可快速、高效培育优质B9苹果砧木的快繁技术。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

根据目前技术上存在的问题，本发明提出一种苹果砧木B9组培快繁方法，能够解决现有技术上的不足。

一种苹果砧木B9的组培快繁方法，所述方法包括以下步骤：

(1)取外植体接种于增殖培养基，光照培养诱导形成丛生芽；其中，所述增殖培养基包括MS培养基、25-35g/L蔗糖、0.4-1.0mg/L 6-BA和0.3-0.5mg/L NAA，pH5.6-6.0；培养条件包括：光照时间8-14h/d，光照强度2500-3000Lx，培养时间25-35d；

(2)取株高≥2cm的丛生芽接种至无糖生根培养基，在800-1500ppm二氧化碳浓度下光照培养至完全生根；其中，所述无糖生根培养基为不含激素、糖和琼脂的1/2MS培养基；所述培养包括：光照时间10-12h/d，光照强度不低于3000Lx。

在组培快繁过程中，激素浓度越高玻璃化苗现象越严重。本发明所述组培快繁方法在增殖培养基中使用较高浓度6-BA刺激外植体增殖，以提高增殖系数；同时，配合高强度光照，可以有效减少甚至避免组培过程中由高浓度激素刺激引起的玻璃化苗现象。因此，本发明所述方法在激素高的同时采用强光照即控制了玻璃化苗的产生又增强了增殖率，可以快速扩繁，缩短周期。

同时，本发明所述方法还采用无糖培养生根缩短了组培周期，提高生根率，光自养内源激素刺激生根，提高了移栽成活率，移栽后植株生长速度快，长势壮，并且可以有效缩短甚至完全省略炼苗过程，极大地缩短组培快繁周期。

在一些具体实施方式中，步骤(1)所述增殖培养基中6-BA的浓度为0.4mg/L、0.5mg/L、0.6mg/L、0.7mg/L、0.8mg/L、0.9mg/L、1.0mg/L。

在一些具体实施方式中，步骤(1)所述增殖培养基包括MS培养基、30g/L蔗糖、0.8mg/L 6-BA和0.4mg/L NAA，pH5.8。

在一些具体实施方式中，步骤(1)所述增殖培养基中还包括活性炭，优选1-3g/L活性炭，更优选为2g/L活性炭。丛生芽诱导过程容易受褐化影响从而减轻脱毒成活率。为解决上述问题，本发明所述增殖培养基中添加2g/L的活性炭，在不影响植物生长的同时可以有效减轻褐化。