[发明专利]一种苹果砧木B9的组培快繁方法

权利要求书

1.一种苹果砧木B9的组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)取外植体接种于增殖培养基，光照培养诱导形成丛生芽；其中，所述增殖培养基包括MS培养基、25-35g/L蔗糖、0.4-1.0mg/L 6-BA和0.3-0.5mg/L NAA，pH5.6-6.0；培养条件包括：光照时间8-14h/d，光照强度2500-3000Lx，培养时间25-35d；

(2)取株高≥2cm的丛生芽接种至无糖生根培养基，在800-1500ppm二氧化碳浓度下光照培养至完全生根；其中，所述无糖生根培养基为不含激素、糖和琼脂的1/2MS培养基；培养条件包括：光照时间10-12h/d，光照强度不低于3000Lx。

2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(1)的增殖培养基包括MS培养基、30g/L蔗糖、0.8mg/L 6-BA和0.4mg/L NAA，pH5.8。

3.根据权利要求2所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述增殖培养基中还包括活性炭，优选1-3g/L活性炭，更优选为2g/L活性炭。

4.根据权利要求1-3任一项所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述培养条件包括：光照时间10-12h/d，光照强度2800Lx，培养时间30d。

5.根据权利要求4所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(1)还包括：培养所述外植体形成侧芽后，增加远红外光侧照，优选地，所述远红外光侧照时间为10-25min/d，更优选为15min/d。

6.根据权利要求5所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)还包括培养过程中采用昼夜温差刺激所述从生芽生长，其中，光照培养温度为23-25℃，暗培养温度低于光照培养温度8-10℃，更优选为9℃。

7.根据权利要求6所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(2)所述无糖培养基还包括作为基质的蛭石，所述光照强度为4000Lx。

8.根据权利要求7所述的组培快繁方法，其特征在于，所述方法还包括从无菌试管苗切取带叶芽茎段作为步骤(1)所述外植体的步骤；

优选地，所述方法还包括培育所述无菌试管苗：取完全木质化B9枝条，诱导出芽，剥出茎尖，消毒后接种于MS空白培养基，先暗培养，再光照培养30-40d，优选35d，获得所述无菌试管苗；其中，光照时间为10-12h/d，优选10h/d，光照强度2500-3000Lx，优选2800Lx，培养温度23-25℃，优选24℃。

9.根据权利要求8所述的组培快繁方法，其特征在于，所述B9枝条为冬天枝条，诱导出芽过程中不添加任何辅助剂诱导，诱导芽在剥出茎尖之前先冷藏18-30h，优选24h。

10.根据权利要求9所述组培快繁方法，其特征在于，所述方法还包括：(3)省略炼苗，直接移栽步骤(2)所得完全生根的试管苗。