[发明专利]提高西番莲初代培养成活率的方法

权利要求书

1.一种提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)初代培养基制备；

(2)外植体培育：选择西番莲枝条，将枝条剪成含有1-2个芽的茎段，剪去部分叶片，扦插于育苗盆内，置于大棚，扦插时喷一次杀菌、杀虫及防控病毒的药剂，之后每隔5-10天喷一次药剂，栽培一段时间后取枝条作为外植体进行组培；

(3)外植体消毒：剪去枝条的叶片，将枝条剪成多段，腋芽位于茎段中部，然后用含有HgCl₂和抗坏血酸的消毒液消毒；

(4)外植体接种及培养。

2.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(1)初代培养基的制备方法包括以下步骤：

(1)初代培养基配方：MS基本培养基、6-BA 0.5-1.5mg/L、IBA 0.05-0.15mg/L、抗坏血酸0.001-0.02g/L、水解酪蛋白0.2-0.3g/L、蔗糖20-40g/L、琼脂4-7g/L；

(2)调节培养基PH至5.8-6.0，分装在容器中，在容器口塞上棉塞，包覆牛皮纸并扎牢，然后在110-120℃条件下高压灭菌15-20min。

3.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(2)中剪去部分叶片为剪去叶片的2/3-3/4。

4.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(2)中药剂包括杀菌剂、杀虫剂和防控病毒药剂中的一种或几种混合；喷洒时不同的药剂交替使用；其中，

所述杀菌剂包括咪鲜胺、多菌灵、噁霉灵中的一种或几种混合；

所述杀虫剂包括高效氯氰菊酯、阿维菌素、啶虫脒中的一种或几种混合；

所述防控病毒药剂包括阿泰灵、毒氟磷中的一种或几种混合。

5.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(3)中的消毒液包括质量浓度为0.05-0.15％HgCl₂+0.005-0.05g/L抗坏血酸。

6.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(3)外植体消毒为：剪去枝条的叶片，置于质量浓度为2-4％的洗洁精溶液中浸泡10-15min，再用流水冲洗20-30min，然后置于杀菌剂溶液中浸泡10-15min，在超净工作台上用消毒液浸泡3-6min，再用无菌水冲洗多次。

7.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(3)中将枝条剪成3-9cm的小段。

8.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(3)中将枝条剪成6-9cm的小段。

9.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(4)外植体接种前对茎段进行处理，在超净工作台上切去茎段切口处0.3-1cm左右，接入培养基中的外植体长度保持5-7cm，将茎段接种在初代培养基上。

10.根据权利要求1所述的提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，步骤(4)中茎段接种在初代培养基上，置于温度为24-26℃、湿度低于40％的培养室中培养，光强为2000-3000lx，光照时间10-12h/天。