[发明专利]一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法

说明书

本发明涉及辅助生殖技术领域，公开了一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法，所述精子冷冻液包括冷冻保护剂、组合物和基础培养液；其中，所述冷冻保护剂包括紫杉醇0.3～1.1mg/L、海藻糖16～22g/L、蔗糖7～13g/L和甘油80～250mL/L；所述组合物包括白藜芦醇12～26mg/L、还原型谷胱甘肽0.2～1.9mg/L、卵磷脂436～775mg/L、胆固醇0.5～1.6mg/L、ATP钠盐9～17mg/L、肝素11～28mg/L、磷脂酰丝氨酸93～299mg/L和辅酶Q10 5～25mg/L；本发明的精子冷冻液能够降低精子在低温冷冻和冷冻复苏过程中的损伤、提高精子冷冻复苏后活力、延长精子冷冻复苏后存活时间、促进精子获能以及增强精子对卵细胞的穿透受精能力，进而提高卵子的受精成功率和囊胚形成率，最终达到提高体外受精辅助生殖技术的妊娠成功率的效果。

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术领域，具体是一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法。

背景技术

体外受精(in vitro fertilization，IVF)，又称试管婴儿，是一种辅助生殖治疗的方法，具体是指分别将卵子与精子从体内取出后，在体外特定的环境条件下使精子与卵子结合受精形成受精卵，待受精卵在体外连续培养发育至囊胚期胚胎后再将胚胎移植回母体子宫内妊娠发育成胎儿。

在体外受精辅助生殖技术中，男性基于未来优生优育计划的考虑，可将自身精子冷冻于具有相应资质的医疗机构中，以防未来生育风险；各大精子库和辅助生殖医疗机构需要将经检验合格的精子进行冷冻保存用作体外受精辅助生殖需要。同时，一些严重的少精弱精症患者，为了防止日后发展成无精症以致彻底丧失生育能力，也可以预先在治疗少精症的过程中将精子进行冷冻长期保存，在后期需要时用于辅助生殖技术治疗不孕不育，由此顺利实现生育下一代的目的。

目前，市面上现有的精子冷冻液主要分为两大类，分别是含卵黄和不含卵黄的，但其均存在一些缺点：一方面，由于卵黄中除含有卵磷脂外，还包括很多复杂成分，利用含卵黄的精子冷冻液进行精子冷冻复苏后会出现颗粒状物质，影响进一步的处理过程，同时因卵黄属于异种源物质，还存在一定的生物风险；另一方面，不含卵黄的精子冷冻液因仅含有基础盐离子、少量氨基酸和单一的精子冷冻保护剂等，对精子的冷冻保护作用有限，存在很大的提升空间。

因此，我们亟需一种无杂质、具有生物安全性和功能多样性的精子冷冻液。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种精子冷冻液及其制备方法，以达到降低精子在低温冷冻和冷冻复苏过程中的损伤、提高精子冷冻复苏后活力、延长精子冷冻复苏后存活时间、促进精子获能以及增强精子对卵细胞的穿透受精能力，进而提高卵子的受精成功率和囊胚形成率的效果。

本发明的另一目的在于克服现有技术的不足，提供一种冷冻保护剂及其应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种冷冻保护剂，包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油。

一种冷冻保护剂的应用，是将所述冷冻保护剂用于生殖细胞的冷冻保护，优选为精子的冷冻保护。

一种精子冷冻液，包括基础培养液、冷冻保护剂和组合物，所述冷冻保护剂包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油，所述组合物包括白藜芦醇、还原型谷胱甘肽、卵磷脂、胆固醇、ATP钠盐、肝素、磷脂酰丝氨酸和辅酶Q10。

所述紫杉醇作为具有抗癌活性的二萜生物碱类化合物，是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物，在临床上已经广泛用于乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌的治疗。同时，紫杉醇还能作为一种细胞骨架稳定剂，增强α、β-微管蛋白二聚体的紧密联系，增强微管交联，促进微管聚合和稳定，对细胞超微骨架结构微管的结合具有依赖性和可逆性。通过上述技术方案，利用所述紫杉醇的特异性结合方式来降低精子细胞内部微管骨架的解聚，从而对精子细胞的骨架结构、细胞器的定位和功能起着重要的稳定保护作用。