[发明专利]一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法

权利要求书

1.一种冷冻保护剂，其特征在于，包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油。

2.一种如权利要求1所述冷冻保护剂的应用，其特征在于，是将所述冷冻保护剂用于精子细胞的冷冻保护。

3.一种精子冷冻液，其特征在于，包括基础培养液、冷冻保护剂和组合物，所述冷冻保护剂包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油，所述组合物包括白藜芦醇、还原型谷胱甘肽、卵磷脂、胆固醇、ATP钠盐、肝素、磷脂酰丝氨酸和辅酶Q10。

4.根据权利要求3所述的精子冷冻液，其特征在于，所述基础培养液包括溶剂和溶质，所述溶剂包括水，所述溶质包括氯化钠5～12g/L、氯化钾311～433mg/L、氯化钙110～230mg/L、硫酸镁22～36mg/L、磷酸二氢钾46～55mg/L、碳酸氢钠322～396mg/L、葡萄糖0.51～2.34g/L、氨基酸或其盐46～88mg/L、丙氨酰谷氨酰胺204～247mg/L、乳酸钠2.31～2.46mg/L、丙酮酸钠34.1～38.9mg/L、牛磺酸9.82～12.36mg/L、HEPES1.8～2.9g/L和MOPS1.6～2.7g/L。

5.根据权利要求4所述的精子冷冻液，其特征在于，所述冷冻保护剂中各组分的含量如下：紫杉醇0.3～1.1mg/L、海藻糖16～22g/L、蔗糖7～13g/L和甘油80～250mL/L；

所述组合物中各组分的含量如下：白藜芦醇12～26mg/L、还原型谷胱甘肽0.2～1.9mg/L、卵磷脂436～775mg/L、胆固醇0.5～1.6mg/L、ATP钠盐9～17mg/L、肝素11～28mg/L、磷脂酰丝氨酸93～299mg/L和辅酶Q105～24mg/L。

6.根据权利要求5所述的精子冷冻液，其特征在于，还包括人血白蛋白5～15g/L和硫酸庆大霉素7～14mg/L。

7.制备如权利要求6所述的精子冷冻液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.在百级条件下，按配比称量所述还原型谷胱甘肽、ATP钠盐、肝素、海藻糖、蔗糖、氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、葡萄糖、氨基酸或其盐、丙氨酰谷氨酰胺、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、HEPES和MOPS，并加入水中混合均匀，得到溶液I；

S2.按配比称量所述白藜芦醇、辅酶Q10、紫杉醇和胆固醇，并加入乙醇中混合均匀，得到溶液Ⅱ；

S3.按配比称量所述卵磷脂、磷脂酰丝氨酸和甘油，混合均匀，得到溶液Ⅲ；

S4.将所述溶液Ⅱ搅拌滴加至溶液Ⅲ中，得到溶液Ⅳ；

S5.按配比称量所述碳酸氢钠、人血白蛋白和硫酸庆大霉素；

S6.取所述溶液Ⅳ、碳酸氢钠、人血白蛋白、硫酸庆大霉素与溶液I混合均匀，得到溶液Ⅴ；

S7.将溶液Ⅴ与pH调节剂混合，得到pH＝7.10～7.20的溶液Ⅵ；

S8.所述溶液Ⅵ经无菌过滤处理后，得到所述精子冷冻液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，S1～S7中，环境温度均为18～26℃，环境湿度均为40％～60％。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，S7中，所述pH调节剂为氢氧化钠溶液。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，S8中，所述无菌过滤处理具体为：使用孔径为0.22μm或0.45μm的滤膜对所述溶液Ⅵ进行过滤。