[发明专利]一种发光细菌冻干粉试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及水质检测试剂盒技术领域，特别涉及一种发光细菌冻干粉试剂盒及其制备方法。该制备方法包括：将菌种冻干粉复苏，接种培养，得到发光细菌菌液，256倍稀释后检测其发光量；吸取一定量体积的发光细菌菌液进行冷冻离心，得到菌体；将菌体与保护剂混合，得到菌体混合液；将菌体混合液进行真空冷冻干燥，得到发光细菌冻干粉；所得发光细菌冻干粉、稀释液、渗透压调节液、质控标准物质溶液组成发光细菌冻干粉试剂盒。本发明实现了生产过程中对试剂盒初始发光量、CF值、正控值、负控值等重要参数的稳定性调控，可保证不同制备批次间的性能一致性，有效避免了使用不同批次试剂盒来评价同一水体毒性时会出现偏差的情况。

技术领域

本发明涉及水质检测试剂盒技术领域，特别涉及一种发光细菌冻干粉试剂盒及其制备方法。

背景技术

随着水体污染日益严重，大量的有毒有害污染物被排放到湖泊、河流和海洋，对水生生态系统的生态平衡和生物体造成危害，相对于传统的鱼类、蚤类、浮游生物检测方法，发光细菌法检测水质生物毒性具有检测快速、简便等优点，在国内外得到广泛应用。

发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响，判断毒物毒性的大小。目前，GB/T15441-1995中所使用的发光细菌法测定水质急性毒性的实验中，不同批次发光菌的检测结果差异较大；市场上现有的一些试剂盒也不能保证很好的批次稳定性，各个批次间检测重复性较差，各不同批次间初始发光量、CF值、正控值、负控值等重要参数波动较大，当使用不同批次来评价同一水体毒性时经常会出现偏差。

公开号为CN201210567442.5专利中公开了一种水质急性毒性高通量快速测定试剂盒制作及使用方法，该制作方法包括：1)发光菌冻干粉的制备；2)菌液稀释水的配制；3)苯酚母液的配制；4)制作配件并装盒。但该试剂盒的制备方法中只有试剂盒冻干粉制备环节，未提及在生产过程中对试剂盒重要参数调控的技术内容，导致试剂盒的批次间重复性较差。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种发光细菌冻干粉试剂盒及其制备方法。该方法优化了生产制备工艺，在生产过程中可对试剂盒的初始发光量、CF值、正控值、负控值等重要参数进行准确调控，可保证良好的批次重复性，减小不同批次间的测量误差。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种发光细菌冻干粉试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：将菌种冻干粉复苏，接种培养，得到发光细菌菌液，将发光细菌菌液稀释256倍后检测，发光量为w；

步骤2：将zmL发光细菌菌液进行冷冻离心，得到菌体；按公式(1)、(2)调整离心所用的发光细菌菌液体积z：

y＝0.00000006x²-0.0044x+1000000 (1)

z＝y÷w (2)

其中，x为发光细菌冻干粉试剂盒产品的初始发光量，x为10万至1000万中任一数值，w为菌体256倍稀释后检测得到的发光量；

步骤3：将菌体与10～100mL保护剂混合，得到菌体混合液；保护剂由0.001～0.05g/mL精氨酸、浓度为pg/mL的脱脂奶粉、0.01～0.05g/mL氯化钠、0.05～0.3g/mL淀粉、0.05～0.3g/mLD-山梨醇、0.01～0.05g/mL维生素E和水组成；脱脂奶粉的浓度p值由公式(3)、(4)得到：

p＝m×z÷3.5 (4)

其中，n为试剂盒正控值，z为离心所用的发光细菌菌液体积；

步骤4：将菌体混合液进行真空冷冻干燥，得到发光细菌冻干粉；