[发明专利]一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法

说明书

本发明公开了一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法，步骤：在PDA斜面固体培养基上于25℃条件下培养7d完成蝉拟青霉4606菌种活化；转接至装有50ml液体培养基的150ml三角瓶中，25℃，150r/min，振荡培养72h～96h；菌体呈球状且均匀分布于锥形瓶内时，将所得种子菌体按照相应的接种量需求接种到装有150ml液体培养基的500ml三角瓶中，25℃，150r/min，振荡培养72h～96h；菌体呈球状均匀分布于锥形瓶内时，离心取沉淀物称重获得生物量。本发明采用蝉拟青霉4606作为实验对象，结合响应面法验证影响蝉拟青霉液体培养下生物量变化的因素和参数设定范围，得到一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法。

技术领域

本发明属于微生物液体培养条件优化，具体地涉及一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法。

背景技术

蝉拟青霉Paecilomyces cicadae是我国的一种传统中药材，在功效上与冬虫夏草极为相似，且与冬虫夏草的无性型同属。蝉拟青霉胞内含有多种具有应用价值的物质，比如虫草多糖、腺苷、氨基酸、虫草素、麦角甾醇以及必需氨基酸等，这些物质通常作为保健品以及部分药品的成分，因此蝉拟青霉具有滋补强壮、抗疲劳应激、解热镇痛、镇静催眠等多种医用效果，对该真菌进行更深层次的研究有助于开发出更多低成本保健品以及医用药品。通过优化液体培养条件，提升蝉拟青霉培养效率，增大其生物量，可以为其研究提供丰富的试验材料。

目前，关于蝉拟青霉液体培养条件优化的报道很少，在已有的研究报道中，大多以正交试验方法为基础展开对蝉拟青霉液体培养条件的优化。本申请以纯净无污染的高产菌株蝉拟青霉4606为原料，采用响应面法优化蝉拟青霉液体培养条件，确定液体培养的最佳条件，旨在为蝉拟青霉的进一步研究以及开发利用提供技术参数和理论指导。

发明内容

本发明的目的在于通过响应面法优化蝉拟青霉液体培养条件，确定最佳液体培养条件。

本发明的目的是采取以下技术方案达到的：

一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法，包括以下步骤：在PDA斜面固体培养基上于25℃条件下培养7d完成蝉拟青霉4606菌种活化；转接至装有50ml液体培养基的150ml三角瓶中，在25℃，150r/min条件下，振荡培养72h～96h；待菌体呈球状且均匀分布于锥形瓶内时，将所得种子菌体按照相应的接种量需求接种到装有150ml液体培养基的500ml三角瓶中，在25℃，150r/min条件下，振荡培养72h～96h；菌体呈球状均匀分布于锥形瓶内时，离心取沉淀物称重获得生物量；其中最佳液体培养条件为：葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、酵母膏2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO₄0.5g/L、接种量6.65％、pH为6.00、温度24.01℃。

本发明是采用蝉拟青霉4606作为实验对象，结合响应面法逐步验证影响蝉拟青霉液体培养下生物量的因素和参数设定范围，最终得到一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法。

附图说明

图1是PH和接种量对蝉拟青霉生物量的影响结果。

图2是温度和接种量对蝉拟青霉生物量的影响结果。

图3是PH和温度对蝉拟青霉生物量的影响结果。

具体实施方式

本发明是通过以下实施例得出的：

一种提高蝉拟青霉生物量的液体培养方法，包括以下步骤：