[发明专利]一种由甘蔗发状根诱导成苗的组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种甘蔗组织培养扩繁方法，包括下述步骤：

1)以甘蔗茎尖为外植体，在发状根诱导培养基中进行培养，获得甘蔗发状根；

2)将所述甘蔗发状根转接至愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，获得甘蔗愈伤组织；

3)将所述愈伤组织切成块，然后接种到成苗培养基中进行成苗诱导，获得甘蔗无菌幼苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述甘蔗茎尖具体可按照下述方法获取得到的：于连续晴朗的艳阳天上午9:00-10:00，砍下成熟的甘蔗茎尖段，剥离外层组织，于超净工作台中取幼嫩茎尖；

所述甘蔗茎尖在使用前，需截去头尾段，并切成1-2cm小段。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述发状根诱导培养基为含0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸和0.2mg/L灵发素的MS基本培养基，其中，所述MS基本培养基中蔗糖浓度为25g/L，琼脂添加量为6g/L，pH值为6.4。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述培养的条件为：先置于黑暗条件下培养11-14d，培养温度为(26±2)℃；随后转入光照培养阶段培养18-23d，光照周期设置为12h光/12h暗，光照强度28-30瓦，培养温度为(26±2)℃。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述愈伤组织诱导培养基为含0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L激动素和0.5mg/L油菜素内酯的MS基本培养基。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述愈伤组织诱导培养的条件为：光照培养33-41天，光照周期设置为12h光/12h暗，光照强度为28-30瓦；培养温度为(26±2)℃。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述成苗培养基选自下述任意一种：

1)含0.5mg/L激动素、0.2mg/L吲哚丁酸、300mg/L脯氨酸的MS基本培养基；

2)含0.5mg/L激动素、0.2mg/L油菜素内酯、300mg/L脯氨酸的MS基本培养基。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述成苗诱导的条件为：光照培养15-21天，光照周期设置为12h光/12h暗，光照强度为28-30瓦；培养温度为(26±2)℃；所述步骤3)中，所述愈伤组织切成1-2cm的小块。

9.一种愈伤组织诱导培养基，其为含0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L激动素和0.5mg/L油菜素内酯的MS基本培养基。

10.一种用于甘蔗组织培养扩繁的试剂盒，包括：发状根诱导培养基、愈伤组织诱导培养基、成苗培养基；

其中，所述发状根诱导培养基为含0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸和0.2mg/L灵发素的MS基本培养基，其中，所述MS基本培养基中蔗糖浓度为25g/L，琼脂添加量为6g/L，pH值为6.4；

所述愈伤组织诱导培养基为含0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L激动素和0.5mg/L油菜素内酯的MS基本培养基；

所述成苗培养基选自下述任意一种：

1)含0.5mg/L激动素、0.2mg/L吲哚丁酸、300mg/L脯氨酸的MS基本培养基；

2)含0.5mg/L激动素、0.2mg/L油菜素内酯、300mg/L脯氨酸的MS基本培养基。