[发明专利]一种尿酸钠诱导产生髓系抑制性细胞的方法

说明书

本发明公开了一种尿酸钠诱导产生髓系抑制性细胞的方法，包括以下步骤：(1)从样本中分离单核细胞；(2)用含GM‑CSF的完全培养基对步骤(1)获得的单核细胞进行体外培养；(3)向步骤(2)所述培养体系中加入尿酸钠继续进行体外培养，获得髓系抑制性细胞。本发明方法安全简单，可快速诱导产生具有免疫抑制功能的髓系抑制性细胞，通过本发明方法制备得到的髓系抑制性细胞可用于治疗自身免疫性疾病和肿瘤性疾病等，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种尿酸钠诱导产生髓系抑制性细胞的方法。

背景技术

髓系抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是最初在荷瘤小鼠中被鉴定的具有免疫抑制功能的异质类细胞群。肿瘤细胞通过释放可促进髓系细胞积聚的可溶性因子来调节骨髓和脾脏等部位的组织微环境，这些髓系细胞随后促进新生血管形成和转移，进而形成肿瘤微环境，致使原本髓系细胞从其正常分化途径发育为成熟巨噬细胞、树突状细胞和粒细胞的最终分化转向高度免疫抑制状态下分化为未成熟髓系细胞的积累，这些细胞被命名为髓系抑制性细胞，以突出它们共同的髓系来源和免疫调节特性。与MDSCs表型相同的未成熟髓系细胞(Immature myeloid cells，IMCs)在健康个体的骨髓中不断生成并分化为成熟髓系细胞，但并没有免疫抑制功能。MDSCs主要分为两个亚群：粒细胞PMN-MDSCs和单核M-MDSCs。在大多数类型的癌症中，PMN-MDSCs占全部MDSCs的70-80％，而M-MDSCs通常不超过20％。

目前的研究表明MDSCs与肿瘤、慢性感染、创伤和炎症等多种疾病的发生发展密切相关。尽管目前在髓系来源的抑制性细胞相关领域的研究取得了重大的突破，但是由于髓系来源的抑制性细胞细胞数量少、可用于细胞治疗的、安全的、非肿瘤来源的髓系来源的抑制性细胞的体外扩增方法目前尚未有详尽描述。

尿酸钠，分子式为C₅H₃N₄O₃Na，外观为白色或白中夹带黄色的抛物状粉末。尿酸钠被认为和痛风性关节病的发病机理和草酸钙结石的形成有关。溶于氢氧化钠，几乎不溶于乙醇。尿酸钠已用于逆转活性氧和氮代谢产物对酶活性的抑制作用。有研究表明兔血清中分离的免疫球蛋白分子与尿酸钠晶体进行了抗体种群在其承担的结合位点的晶体表面结构的印记的形成。

因而，开发一种简单快速地体外扩增髓系来源的抑制性细胞的技术，用于炎症、自身免疫性等疾病的细胞治疗，将具有重大的现实意义和客观临床需求。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种尿酸钠诱导产生髓系抑制性细胞的方法，所述方法安全简单，可快速诱导产生具有免疫抑制功能的髓系抑制性细胞。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种尿酸钠诱导产生髓系抑制性细胞的方法，包括以下步骤：

(1)从样本中分离单核细胞；

(2)用含GM-CSF的完全培养基对步骤(1)获得的单核细胞进行体外培养；

(3)向步骤(2)所述培养体系中加入尿酸钠继续进行体外培养，获得髓系抑制性细胞。

优选地，所述步骤(1)中的样本为小鼠骨髓或人外周血。

更优选地，所述小鼠为6-8周龄的C57小鼠。

优选地，所述步骤(2)中的完全培养基由RPMI 1640和包含以下原料的组分制备而成：

胎牛血清 10v/v％；

β-巯基乙醇 50uM。

优选地，所述完全培养基中还含有抗生素。