[发明专利]核桃青皮中一种三萜化合物的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种从核桃青皮中分离获得的达玛烷型三萜化合物衍生物及其制备方法和应用，涉及医药技术领域，该化合物分子式为C₃₃H₅₄O₃，体外抗肿瘤活性研究表明其具有抗肿瘤活性，包括对人胃癌细胞BGC‑823、人肝癌细胞HepG‑2及人结肠癌细胞HT‑29均具有明显的抑制作用。本发明可以有效解决核桃青皮利用率低，被废弃后造成环境污染等问题，同时可为抗肿瘤药物的开发提供药效物质基础来源，具有重要的开发和应用价值。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种从核桃青皮中分离得到的达玛烷型三萜化合物衍生物及其制备方法和在制备抗癌药物上的应用。

背景技术

核桃青皮，又名青龙衣，是胡桃科胡桃属植物胡桃树未成熟果实的肉质果皮。其味苦，涩，性平；具有解毒杀虫，止痛、止咳、止泻的功效。《本草纲目》记载，核桃青皮可以用来治疗白癜风及嵌甲。《急救方》称其能治疬疡。《山东中草药手册》也指出核桃青皮能解毒消肿，可用治痈肿疮毒。现代研究表明，核桃青皮提取物可抑制体外培养的肿瘤细胞的增殖，其机理是能够直接杀伤肿瘤细胞；不论民间还是临床上都得到广泛应用，如对胃癌、肝癌和结肠癌等消化道恶性癌变疗效显著，是一种前景良好的抗肿瘤药物。但目前对其产生抗肿瘤作用的有效成分尚不确定，因此对青龙衣开展活性成分挖掘工作是十分必要的。

同时，随着我国核桃种植规模和产量的稳步扩大，核桃加工过程带来了大量废弃的核桃青皮，不仅造成了资源的浪费，还带来了环境污染。缓解这一矛盾的主要方法就是对核桃青皮开展深加工和综合利用。

发明内容

本发明属于医药技术领域，发明的目的在于提供一种新的达玛烷型三萜化合物衍生物及其制备方法和医药用途，以进一步提高核桃青皮利用率并解决其被废弃后污染环境的问题。

一种从核桃青皮中分离得到的具有抗肿瘤活性的达玛烷型三萜化合物衍生物青龙衣三萜大环缩酮I，其化学结构式为：

分子式为C₃₃H₅₄O₃。

本发明还提供了该达玛烷型三萜化合物衍生物的制备方法：依次通过95%乙醇提取、大孔树脂富集纯化、二氯甲烷萃取、正相硅胶柱色谱和葡聚糖凝胶柱色谱分离、重结晶制备得到。具体制备步骤如下：

（1）醇提：将核桃青皮干品，适当粉碎，然后加入95%乙醇回流提取1～3次，药材重量与乙醇体积比为1:8～1:12，减压回收提取液得到乙醇粗提物浸膏；

（2）大孔树脂富集纯化：将步骤（1）所得乙醇粗提物浸膏用水分散至相对密度为1.20±0.05g/mL的溶液，经AB-8或D101型大孔树脂柱色谱富集纯化，分别以30%乙醇、90%乙醇依次洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收溶剂得90%乙醇洗脱部位的浸膏；

（3）二氯甲烷萃取：将步骤（2）所得90%乙醇洗脱部位的浸膏悬浮于水中得混悬液，混悬液体积是原有90%乙醇浸膏的5倍，再用与混悬液等体积的二氯甲烷萃取5～8次，合并萃取液，回收溶剂得到二氯甲烷萃取物；

（4）正相硅胶柱色谱分离：取步骤（3）所得二氯甲烷萃取物进行正相硅胶柱色谱分离，所述硅胶柱内的拌样硅胶为80～100目，拌样硅胶与二氯甲烷萃取物质量比为2:1～5:1；所述硅胶柱内的装柱硅胶为200～300目的柱层析硅胶，装柱硅胶与二氯甲烷萃取物质量比为10:1～15:1。依次采用体积比为50:1、20:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱，每一个比例洗脱5个柱体积，其中体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分减压回收溶剂得到分离产物；

（5）葡聚糖凝胶柱色谱分离：取经步骤（4）分离后的产物，通过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和水体积比2:1的混合溶剂进行洗脱，洗脱5个柱体积，弃去前2个柱体积洗脱液，收集后面3个柱体积洗脱液，回收溶剂，得粗品；