[发明专利]吡咯里西啶类生物碱的分析方法

说明书

本发明涉及吡咯里西啶类生物碱的分析方法，其是针对作为分析对象的样品，使用探针电喷雾电离质谱法，分析吡咯里西啶类生物碱的方法，所述方法具备以下步骤：稀释步骤，在所述样品中添加缓冲液进行稀释；以及，质谱分析步骤，将稀释后的所述样品进行探针电喷雾电离，并导入到质谱分析装置，所述缓冲液含有选自酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸和该羧酸的铵盐组成的组中的任一种或两种以上。

技术领域

本发明涉及分析化学、质谱分析、中草药分析等领域，尤其涉及一种吡咯里西啶类生物碱的分析方法。

背景技术

吡咯里西啶类生物碱(PAs)，又称双稠吡咯啶生物碱，是一类分布广泛的植物毒素。PAs已在13个科的植物中检出，多数属于紫草科(聚合草属和天芥菜属)、菊科(千里光属、狗舌草属、橐吾属及泽兰属)和豆科(野百合属)。PAs大部分具有肝毒性，一些PAs还有致癌、致突变和致畸胎的毒性。

随着人们对PAs毒性认识的不断深入，规定的PAs摄入量也越来越严格。2014年，欧洲药品管理局要求所有来源的短期口服药中的PAs的日摄入限值为0.005μg/kg(按平均体重65kg)。千里光作为一种常见的中草药，含有较多的阿多尼弗林碱(adonifoline)。中国药典(2015版)规定千里光中的阿多尼弗林碱含量应低于0.004％(40μg/g)。PAs广泛存在于草药、茶叶、谷物中，可以通过食物链传递进入人体，危害人的健康。因此，迫切需要开发一种快速筛查方法来有效地监测其含量。

对于吡咯里西啶类生物碱的定性定量，传统的方法一般是先提取，然后纯化或者稀释后，经色谱分离后再进行检测。例如，传统的吡咯里西啶类生物碱的分析方法，有的采用固相萃取法对样品进行纯化，需要经过活化、上样、淋洗和洗脱四个步骤，步骤繁复。此外，还公开了基于多相萃取系统对中药制剂中吡咯里西啶生物碱进行纯化的方法(参照专利文献1)。然后，在进行液相色谱分离时，分析时间长(一个化合物分析时间通常20分钟(min))，消耗大量有机溶剂，造成环境污染。最后用紫外、荧光或者质谱进行检测。如果采用APCI或者ESI电离源进行检测时，还需要消耗大量脱溶剂气和雾化气。

近年来，作为检测吡咯里西啶类生物碱的方法，例如报道了，通过GC-MS、LC-(ESI)-MS/MS进行植物提取物中吡咯烷核生物碱的鉴定和定量(非专利文献1)；通过UPLC-UV和HPLC-TOF-MS分析PAs(非专利文献2)；以及通过液相色谱-质谱/质谱法测定蜂蜜中的5种PAs(非专利文献3)。其中，各方法都需要色谱分离然后用质谱进行检测，尤其是非专利文献1中记载的GC-MS法还需要在MS分析之前进行还原和衍生化步骤。因此，操作烦杂，分析耗时，例如上述非专利文献中记载的方法的分析时间往往需要数分钟、甚至数十分钟。

如上可见，现有技术中，在通过质谱分析法进行吡咯里西啶类生物碱的定量分析必须预先进行GC或LC分离步骤，分析时间非常长，另一方面，基于高分辨率质谱技术，虽然有可能实现较为快速的定性分析，但难以期待实现可靠的定量分析。此外，已知的DESI(解吸电喷雾电离)、DART(实时直接分析)等原位质谱都不能实现吡咯里西啶类生物碱的可靠的定量分析。

因此，迫切需要开发快速筛选和定量分析中药和/或食物中的吡咯里西啶类生物碱的方法。

引证文件列表

专利文献

专利文献1：CN108169387A

非专利文献