[发明专利]一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒，其特征在于，包括：痤疮丙酸杆菌特异引物及其探针、乳酸菌属通用引物及其探针、内参引物、阳性对照样品模板、阴性对照样品模板、用于PCR的反应试剂；

所述痤疮丙酸杆菌特异引物及其探针为：

上游引物Pro-F 5′-CCACAACAACCTAGAGTC-3′

下游引物Pro-R 5′-GAACGGAATTAAGTCTGTAAG-3′

探针：FAM-ATAACCACACGCCTACCACGAT-BHQ1。

2.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒，其特征在于，

所述乳酸菌属通用引物及其探针为：

上游引物Lab-F 5′-GGGAATCTTCCACAATGGAC-3′

下游引物Lab-R 5′-CATGGAGTTCCACTCTCCTCT-3′

探针：VIC-ATAACCACACGCCTACCACGAT-BHQ1。

3.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒，其特征在于，

所述内参引物为GAPDH基因引物，所述GAPDH基因引物为：

上游引物GAPDH-F 5′-ACAGCCTCAAGATCATCAGCA-3′

下游引物GAPDH-R 5′-ATGAGTCCTTCCACGATACCA-3′

探针：CY5-GTGCTAAGCAGTTGGTGGTGCAGGA-BHQ2。

4.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照模板为纯化过的标准痤疮丙酸杆菌菌株基因组DNA以及纯化过的标准乳酸菌菌株基因组DNA；

所述阴性对照模板为去离子水。

5.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的试剂盒，其特征在于，所述用于PCR的反应试剂包括Taq酶、dNTP、镁离子、PCR扩增增强物的混合物2*MIX。

6.一种基于微生物PCR技术检测肤质的检测方法，其特征在于，包括：

S10.采集额头暴露处的样品，所述额头暴露处12h内未清洗；

S20.提取样品的DNA；

S30.将提取到的DNA稀释，加入到反应体系中，所述反应体系包括：用于PCR的反应试剂2*MIX 20~30μL，阳性对照模板2~3μL，痤疮丙酸杆菌特异引物及其探针各2~3μL，乳酸菌属通用引物及其探针各1~2μL，内参引物及其探针各0.5~1.5μL，余量为无菌水，进行PCR扩增；

S40.PCR扩增结束后，获取痤疮丙酸杆菌特异引物的Pro-F/Pro-R扩增曲线的CT值，根据该CT值检测是否存在痤疮丙酸杆菌；乳酸菌属通用引物Lab-F/Lab-R扩增曲线CT值，根据该CT值判断是否存在乳酸菌属；根据是否存在痤疮丙酸杆菌或乳酸菌属判断肤质。

7.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的检测方法，其特征在于，所述S10步骤中，采集额头暴露处的样品的方法为：

用湿润的圆头棉签在额头暴露处以稳定的压力来回移动式取样，取样面积10~30cm²，所述圆头棉签用采集液润湿，所述采集液包括0.05~0.2%的吐温20和0.1~0.2 mol / L NaCl溶液；

样品在0~8℃下保存。

8.根据权利要求1所述的一种基于微生物PCR技术检测肤质的检测方法，其特征在于，所述痤疮丙酸杆菌特异引物包括10μmol/L的上游引物Pro-F 1.5μL及10μmol/L下游引物Pro-R 1.5μL，10μmol/L探针1.5μL，所述乳酸菌属通用引物包括10μmol/L的上游引物Lab-F1.5μL及10μmol/L下游引物Lab-R 1.5μL，探针1.5μL；所述内参引物包括10μmol/L的上游引物GAPDH-F 1μL及10μmol/L下游引物GAPDH-R 1μL，探针1μL；无菌水补足反应体系至50μL。