[发明专利]牛源性、鸭源性成分现场快速检测方法及检测试纸条

权利要求书

1.牛特异性RPA标记引物和探针组合，其特征在于，所述RPA标记引物序列如SEQ IDNo.1和2所示，所述探针序列如SEQ ID No.3所示，其中SEQ ID No.2所示的RPA反向引物5’端标记生物素Biotin，探针5’端标记荧光素FITC， 3’端修饰C3 Spacer，探针两端之间修饰四氢呋喃脱碱基位点。

2.包含权利要求1所述牛特异性RPA标记引物和探针组合的检测试剂。

3.根据权利要求2所述的检测试剂，其还包括鸭特异性RPA标记引物和探针组合，所述鸭特异性RPA标记引物序列如SEQ ID No.4和5所示，所述鸭特异性探针序列如SEQ ID No.6所示，其中SEQ ID No.5所示的RPA反向引物5’端标记生物素Biotin，SEQ ID No.6所示探针的5’端标记荧光素FITC， 3’端修饰C3 Spacer，探针两端之间修饰四氢呋喃脱碱基位点。

4.含有权利要求1所述牛特异性RPA标记引物和探针组合或权利要求2或3所述检测试剂的检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其还包括针对RPA核酸扩增产物进行检测的胶体金试纸条，该试纸条包括金标垫、检测线和质控线，所述金标垫上吸附有抗FITC的金标抗体，所述检测线吸附有生物素抗体，所述质控线吸附有抗金标抗体的二抗。

6.一种牛源性成分检测方法，其步骤如下所述：

1）提取样品基因组DNA；

2）用权利要求1所述的引物和探针组合或权利要求2所述的检测试剂进行RPA扩增；

3）利用权利要求5所述的试剂盒中的试纸条对RPA扩增产物进行检测。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述RPA扩增的50 µL扩增体系包括浓度为10 µmol/L的上下游引物各2.1 µL，浓度为10 µmol/L的探针0.6 µL，浓度为50 ng/µL的DNA模板2 µL，RPA反应缓冲液29.5 µL，最后加入ddH₂O补足至50 µL。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，RPA扩增反应程序为：恒温37-42℃，30~40分钟。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，RPA反应程序如下：恒温反应39℃，30分钟。