[发明专利]一种基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法

权利要求书

1.一种基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、配制内相原花青素-羧甲基纤维素钠溶液：将羧甲基纤维素钠溶液与原花青素水溶液混合均匀，得内相；所述内相中羧甲基纤维素钠的终浓度是9～11mg/mL，所述原花青素的终浓度是4～6mg/mL；

S2、配制中间相海藻酸钠-乙二胺四乙酸二钠钙溶液：将海藻酸钠溶液与乙二胺四乙酸二钠钙溶液混合均匀，得中间相；所述中间相中海藻酸钠的终浓度与步骤S1所述内相中羧甲基纤维素钠的终浓度相等，所述乙二胺四乙酸二钠钙的终浓度为9～11mg/mL；

S3、配制外相棕榈油：在棕榈油中加入吐温80和醋酸，在功率100～200W条件下超声25～35min，得外相；其中，所述棕榈油和所述吐温80的体积比是100:1～3，所述棕榈油和所述醋酸的体积比是100:1～3；

S4、配制收集液：将氯化钙溶液与含有醋酸的壳聚糖水溶液混合均匀，得收集液；所述收集液中氯化钙的终浓度为4～6mg/mL，所述壳聚糖的终浓度为4～6mg/mL；所述含有醋酸的壳聚糖水溶液中，醋酸和水的重量比为(0.5～1.5):100；

S5、采用微流控技术制备样品：将步骤S1所述内相、步骤S2所述中间相和步骤S3所述外相通过注射泵注射到微流控装置的芯片内，将所述芯片放置在含有收集液的收集槽内；所述注射泵流速为：内相流速100～120μL/h，中间相流速100～120μL/h，外相流速3550～3650μL/h；反应结束后，将所述收集液离心，去除上层油相，所得溶液是活性因子载运体系；其中，所述内相、中间相、外相和收集液的体积比是1:1:30:(18～48)。

2.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S1所述羧甲基纤维素钠溶液的制备方法为：取羧甲基纤维素钠加入水中，600～1000rpm搅拌6～12h，配制成羧甲基纤维素钠溶液。

3.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S1所述原花青素水溶液的制备方法为：取原花青素加入水中，在功率100～200W超声5～10min，配制成原花青素水溶液。

4.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S2所述海藻酸钠溶液的制备方法为：取海藻酸钠加入水中，600～1200rpm搅拌6～12h，配制成海藻酸钠水溶液。

5.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S2所述乙二胺四乙酸二钠钙溶液的制备方法为：取乙二胺四乙酸二钠钙加入水中，在功率100～200W超声5～10min，配制成乙二胺四乙酸二钠钙溶液。

6.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S4所述氯化钙溶液的制备方法为：取氯化钙加入水中，在功率100～200W超声5～10min，配制成氯化钙溶液。

7.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S4所述含有醋酸的壳聚糖水溶液的制备方法为：取壳聚糖加入含有醋酸的水溶液中，600～1000rpm搅拌6～12h，配制成含有醋酸的壳聚糖水溶液；其中，所述含有醋酸的水溶液中，醋酸和水的体积比是(0.5～1.5):100。

8.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，步骤S5所述离心的参数为：转速3000rpm，时间10min。

9.根据权利要求1所述基于阴离子海藻酸钠的pH响应肠靶向活性因子载运体系的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、配制内相原花青素-羧甲基纤维素钠溶液：

取羧甲基纤维素钠加入水中，600rpm搅拌6h，配制成浓度为20mg/mL的羧甲基纤维素钠溶液；

取原花青素加入水中，在功率100W超声10min，配制成浓度为10mg/mL原花青素水溶液；

将浓度为20mg/mL的羧甲基纤维素钠溶液与浓度为10mg/mL的原花青素水溶液按体积比1:1混合均匀，得内相；

S2、配制中间相海藻酸钠-乙二胺四乙酸二钠钙溶液：

取海藻酸钠加入水中，1000rpm搅拌12h，配制成浓度为20mg/mL的海藻酸钠水溶液；

取乙二胺四乙酸二钠钙加入水中，在功率100W条件下超声10min，配制成浓度为20mg/mL的乙二胺四乙酸二钠钙溶液；

将浓度为20mg/mL的海藻酸钠溶液与浓度为20mg/mL的乙二胺四乙酸二钠钙溶液按照体积比为1:1混合均匀，得中间相；

S3、配制外相棕榈油：

在棕榈油中加入吐温80和醋酸，在功率100W超声30min，得外相；所述棕榈油和所述吐温80的体积比为100:2；所述棕榈油和所述醋酸的体积比为100:2；

S4、配制收集液：

取氯化钙加入水中，在功率100W超声10min，配制成浓度为10mg/mL的氯化钙溶液；

取壳聚糖加入含有醋酸的水溶液中，600rpm搅拌6h，配制成含有醋酸的壳聚糖水溶液；其中，所述醋酸和水的体积比是1:100，所述壳聚糖的浓度为10mg/mL；

将浓度为10mg/mL的氯化钙溶液与含有醋酸的壳聚糖水溶液按照体积比1:1混合均匀，得收集液；

S5、采用微流控技术制备样品：将步骤S1所述内相0.1mL、步骤S2所述中间相0.1mL和步骤S3所述外相3mL通过注射泵注射到微流控装置的芯片内，将所述芯片放置在含有1.8mL收集液的收集槽内；所述注射泵流速为：内相流速120μL/h，中间相流速120μL/h，外相流速3600μL/h；反应结束后，将所述收集液3000rpm离心10min，去除上层油相，所得溶液是活性因子载运体系。