[发明专利]一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂的制备方法

说明书

本发明提供了一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂的制备方法，该冻干剂有效组分及其重量份数比为：羧甲基茯苓多糖30‑50份、蔗糖10‑30份、蜂胶2‑5份、甘氨酸1‑5份、聚乙烯吡咯烷酮1‑2份、维生素C 0.5‑1份、大豆蛋白胨1‑5份。以上组分加蒸馏水混匀在120℃下灭菌15‑30分钟，制得冻干剂；冻干剂与鳜鱼虹彩病卵黄抗体按一定比例充分混匀，定量分装后立即进行真空冷冻干燥。本发明方法成本低，抗体效价高，生物安全性高，有效保证了所得用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体的治疗效果。

技术领域

本发明属于水产生物技术领域，具体涉及一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂及其制备方法。

背景技术

鳜虹彩病毒病，病原主要是鳜传染性肝、肾坏死病毒。感染虹彩病毒的鳜鱼：体表症状不明显或者口腔周围、鳃盖、鳍条基部、尾柄处充血。有的病鱼眼球突出,有蛀鳍现象。濒死鱼鳃盖张开，呼吸变快，身体失衡，鳃丝变白，少部分鱼体色变黑。解剖可见肝脏、脾脏和肾脏肿大，并有出血点，肠壁充血或出血，肠内充满黄色粘稠物。近期鳜鱼病毒病也发病又快又猛，让人措手不及。除了广东和湖北，江苏今年鳜鱼发病形势也非常严峻，近期大量偏小的不到半斤的病鳜鱼清塘，导致近期鳜鱼价格持续下跌。

目前该病还没有有效的治疗方法和药物，因此开发新型药物将有助于该病的防治。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂的制备方法，解决现有用于鳜鱼虹彩病防治困难等难题。

本发明的另一个目的在于提供一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂，缓解现有技术造成的免疫应激反应大，药物残留等问题。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

1、一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂的制备方法，其特征在于：该冻干剂有效组分及其重量份数比为：羧甲基茯苓多糖30-50份、蔗糖10-30份、蜂胶2-5份、甘氨酸1-5份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、维生素C0.5-1份、大豆蛋白胨1-5份。

2、一种如权利要求1所述的一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂的制备方法，其特征在于：该制备方法的步骤为：

(1)按照重量配比分别称取羧甲基茯苓多糖、蔗糖、蜂胶、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、大豆蛋白胨，溶于45-65℃蒸馏水中得溶液A；

(2)将步骤(1)中溶液A在120℃下高压灭菌15-30分钟，2-8℃保存，得冻干剂；

(3)步骤(2)中所得冻干剂与用于鳜鱼虹彩病卵黄抗体溶液比为按体积比1：5-1：9充分混匀，冻干处理，即得本发明一种用于鳜鱼虹彩病的卵黄抗体冻干剂。

而且，步骤(3)中所述鳜鱼虹彩病的卵黄抗体的制备方法的步骤为：

(1)免疫原抗原的制备

病毒的增殖：将鳜鱼虹彩病毒毒株用灭菌生理盐水稀释至200ELD50/0.1ml，经尿囊腔接种10-11日龄鸭胚，每胚0.1-0.2ml，置37℃孵育24小时，照胚弃去24小时内的死胚；对接种24小时后的鸭胚，每4小时照胚一次，将死亡胚放2-8℃冰箱；收集24-120小时死亡鸭胚的尿囊液及胚体，匀浆后，反复冻融2次，再以4200r/min离心20-30分钟，收集上清液，分别定量分装于无菌安培瓶中，注明收获日期、毒种代次，冷冻保存备用；

接种：用灭菌生理盐水将增殖所得病毒毒种稀释10³-10⁵倍，经尿囊腔接种10-11日龄易感鸭胚，每胚0.1-0.2ml，封孔后，置36-37℃继续孵育120小时，不必翻蛋；

孵育：接种后24小时开始照胚，弃去24小时内的死胚，之后每4小时照胚一次，24-120小时死亡的鸭胚随时取出，置于2-8℃冷却12-24小时；