[发明专利]作为阿尔茨海默病的诊断和预后中的标志物的p53肽

说明书

公开了p53肽及它们在生物样品中作为阿尔茨海默病(AD)的诊断和/或预后中的生物标志物的用途。本发明还提供了一种诊断方法，所述诊断方法基于高度精确的质谱分析，通过特异性地定量患者的人类血浆中的所述p53肽的水平，用于对处于疾病的临床前期和前驱期的阿尔茨海默病的诊断，以及用于对受试者中的认知衰退的预后。

发明领域

本发明涉及p53肽P1、P2、P3和P5，以及它们在生物样品中作为阿尔茨海默病(AD)的诊断和/或预后中的生物标志物的用途。本发明还提供了一种诊断方法，所述诊断方法基于高度精确的质谱分析，通过特异性地定量患者的人类血浆中的所述p53肽的水平，用于对处于阿尔茨海默病的临床前期和前驱期的该疾病的诊断，以及用于对受试者中的认知衰退的预后。

背景技术

在不同的已发表研究[1-3]中已经展示了将大量的改变构象的p53异形体(isoform)的存在确认为阿尔茨海默病(简称“AD”)的早期风险因素。最初，AD、轻度认知障碍、帕金森病、其他痴呆和健康受试者中的多于400名受试者被登记到不同的独立研究中，并通过用使用商业构象特异性抗p53抗体的不同技术(免疫沉淀实验、FACS分析、ELISA)对未折叠的p53进行测试[4-7]。2006年Uberti等人[8]首次展示了来自散发性阿尔茨海默病(AD)患者的成纤维细胞特异性表达异常且可检测到的p53构象状态，该构象状态将这些细胞与年龄匹配的非AD受试者的成纤维细胞区分开来。在这种构象改变的状态中，p53失去其反式激活其靶基因的能力，并且因此失去了其生物学功能[9-10]。与健康非痴呆受试者或受其他痴呆和PD影响的患者相比，在AD的血液中以及转化为AD的MCI中也证实了较高量的未折叠的p53。

总之，这些数据表明了未折叠的p53和AD病理之间的直接联系。

在EP3201234B1中，已经报道了一种命名为2D3A8的新的构象特异性抗Up53抗体的开发，该抗体与表位(aa 282-297)结合，该表位仅在p53失去其野生型构象趋向未折叠的表型时才可及(accessible)。与起初在AD中发现未折叠的p53时使用的商业抗体(PAb240，aa214-217)相比，2D3A8抗体在Oviedo队列(cohort)中在与健康老年人相比鉴定AD患者中显示出高的灵敏度和特异性。

特别地，所述免疫诊断方法能够鉴定生物样品中指示AD的免疫复合物，并确定受轻度认知障碍(MCI)影响的受试者发展AD的易感性。

现在需要鉴定可用于阿尔茨海默病的诊断和/或预后的新的特异性生物标志物，并且需要开发可用于AD(特别是处于该疾病的临床前期和前驱期)的诊断和/或预后以及用于对AD与其他形式的痴呆的鉴别分析的精确且合理的诊断方法。

发明概述

通过在生物样品中鉴定具有权利要求书中报告的序列的称为P1(SEQ ID N.1)、P2(SEQ ID N.2)、P3(SEQ ID N.3)和P5(SEQ ID N.5)的四种p53肽，实现了该目的。

本发明的另一方面涉及一种诊断方法，所述诊断方法基于所述肽的鉴定和定量，用于在处于不同期的阿尔茨海默病的诊断和/或预后中使用。

本发明的特征和优点将从以下的详细描述和为说明性目的提供的工作实施例中变得明显。

发明详述

因此，本发明涉及用于对处于疾病的临床前期和前驱期的阿尔茨海默病的诊断的高度精确质谱方法。所述方法基于特异性p53肽的鉴定和水平的定量，所述特异性p53肽简称为“P1”、“P2”、“P3”和“P5”或“p53肽”，已经通过质谱分析在受阿尔茨海默病影响的患者或具有可能倾向于发展AD的症状的患者的人类血浆中检测到。

特别地，质谱分析是在关于p53的这些特定序列和AD之间的确切相关性的信息未知时进行的定性和定量的方法。