[发明专利]用于检测腺相关病毒(AAV)载体转导的增强子和抑制剂和/或检测或定量抗AAV结合抗体的体外测定在审
| 申请号： | 201980089334.1 | 申请日： | 2019-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN113614236A | 公开（公告）日： | 2021-11-05 |
| 发明（设计）人： | 克劳迪亚·库兰达;泽维尔·安谷拉;费德里科·麦格兹 | 申请（专利权）人： | 星火治疗有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N15/65;C12M3/00;C12M1/34;C12Q1/66;G16B30/00 |
| 代理公司： | 上海胜康律师事务所 31263 | 代理人： | 樊英如;张静 |
| 地址： | 美国宾夕*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 相关 病毒 aav 载体 转导 增强 抑制剂 定量 结合 抗体 体外 测定 | ||
1.一种用于分析或检测来自受试者的生物样品中存在腺相关病毒(AAV)载体细胞转导的增强子的方法，其包括：
(a)提供包含重组AAV载体的感染性重组AAV颗粒，其中
(i)所述载体包含报道转基因，
(ii)所述报道转基因包含单链或自互补基因组，
(iii)所述报道转基因与一种或多种表达调控元件能操作地连接；和
(iv)所述报道转基因的侧翼是一个或多个侧翼元件；
(b)提供能被所述感染性重组AAV颗粒感染的细胞；
(c)在使得(b)的所述细胞被(a)的所述感染性重组AAV颗粒转导且所述报道转基因由(b)的所述细胞表达的条件下，使(b)的所述细胞与(a)的所述感染性重组AAV颗粒接触；
(d)测量所述报道转基因的表达并且确定反映(c)的报道转基因表达的量的表示为MAX的值；
(e)提供(a)的感染性重组AAV颗粒；
(f)提供受试者的生物样品；
(g)提供能被所述感染性重组AAV颗粒感染的细胞；
(h)将(f)的所述生物样品与空衣壳AAV颗粒混合以产生混合物(M)并在使得所述空衣壳AAV颗粒能结合所述生物样品中存在的任何AAV结合抗体的条件下孵育所述M；
(i)在使得(e)的所述感染性重组AAV颗粒能转导(g)的所述细胞并在(g)的所述细胞中表达所述报道转基因的条件下，使(g)的所述细胞接触所述M和(e)的所述感染性重组AAV颗粒；
(j)测量所述报道转基因的表达并且确定反映(i)的报道转基因表达的量的表示为S.EV的值；
(k)将所述S.EV与所述MAX进行比较，其中如果所述S.EV大于所述MAX，则来自所述受试者的生物样品包含AAV载体细胞转导的增强子。
2.一种用于分析或检测来自受试者的生物样品中存在腺相关病毒(AAV)载体细胞转导的抑制剂的方法，其包括：
(a)提供包含重组AAV载体的感染性重组AAV颗粒，其中
(i)所述载体包含报道转基因，
(ii)所述报道转基因包含单链或自互补基因组，
(iii)所述报道转基因与一种或多种表达调控元件能操作地连接；和
(iv)所述报道转基因的侧翼是一个或多个侧翼元件；
(b)提供能被所述感染性重组AAV颗粒感染的细胞；
(c)在使得(b)的所述细胞被(a)的所述感染性重组AAV颗粒转导且所述报道转基因由(b)的所述细胞表达的条件下，使(b)的所述细胞与(a)的所述感染性重组AAV颗粒接触；
(d)测量所述报道转基因的表达并且确定反映(c)的报道转基因表达的量的表示为MAX的值；
(e)提供(a)的感染性重组AAV颗粒；
(f)提供受试者的生物样品；
(g)提供能被所述感染性重组AAV颗粒感染的细胞；
(h)将(f)的所述生物样品与空衣壳AAV颗粒混合以产生混合物(M)并在使得所述空衣壳AAV颗粒能结合所述生物样品中存在的任何AAV结合抗体的条件下孵育所述M；
(i)在使得(e)的所述感染性重组AAV颗粒能转导(g)的所述细胞并在(g)的所述细胞中表达所述报道转基因的条件下，使(g)的所述细胞接触所述M和(e)的所述感染性重组AAV颗粒；
(j)测量所述报道转基因的表达并且确定反映(i)的报道转基因表达的量的表示为S.EV的值；
(k)将所述S.EV与所述MAX进行比较，其中如果所述S.EV小于所述MAX，则来自所述受试者的生物样品包含AAV载体细胞转导、由所述载体编码的蛋白质的表达或分泌的抑制剂。
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