[发明专利]用于CAR和TCR转导的模块化多顺反子载体

说明书

本文提供一种模块化多顺反子载体系统，例如用于细胞的基因重编程以表达一种或多种抗原受体。所述系统的模块化特征允许在除了特定顺反子内的一个或多个组分之外的一个或多个顺反子的交换。在特定实施方案中，所述系统的模块化允许嵌合抗原受体的组分的交换，例如共刺激结构域、scFv、铰链、信号传导结构域等的交换。

本申请要求2018年11月19日申请的美国临时专利申请系列号62/769,414；2018年11月30日申请的美国临时专利申请系列号62/773,394；和2019年1月11日申请的美国临时专利申请系列号62/791,491的优先权，所述申请全部以全文引用的方式并入本文中。

序列表

本申请包含序列表，所述序列表已以ASCII格式以电子方式提交并通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2019年11月13日，命名为UTFC_P1152WO_SL.txt，大小为2,502字节。

背景技术

1.领域

本公开内容大体上至少涉及免疫学、细胞生物学、分子生物学、重组技术和医学的领域。更具体地，其涉及多顺反子载体，例如用于表达一种或多种抗原受体。

2.相关技术的描述

尽管诊断和诊断患有癌症的患者可获得的治疗选项中存在显著技术进步，但预后仍通常保持不良并且许多患者无法治愈。免疫疗法有希望向诊断患有各种肿瘤的患者提供强效而具有靶向性的治疗，其具有根除恶性肿瘤细胞而不破坏正常组织的潜力。理论上，免疫系统的T细胞能够识别对肿瘤细胞具有特异性的蛋白质模式并且通过多种效应机制介导其破坏。

用于过继癌症免疫疗法的免疫细胞(例如天然杀伤(NK)细胞)的基因重编程具有临床上相关的应用和益处，例如固有抗肿瘤监视，而无对敏化同种异体功效的先需求，无移植物抗宿主反应性，和目标肿瘤的直接细胞介导的细胞毒性和细胞溶解。施用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(例如过继T细胞疗法或NK细胞疗法)是一种尝试，以利用和放大患者自身免疫细胞的肿瘤根除能力，并且接着在效应子有效消除残余肿瘤然而不损害健康组织的状态下使这些效应子返回至患者。通常，CAR包含对肿瘤相关抗原(TAA)具有特异性的抗体的单链可变片段(scFv)，所述肿瘤相关抗原通过铰链和跨膜区偶联至T细胞信号传导分子的胞质结构域。

多个基因在所需比率下的共表达对广泛的基础研究和生物医学应用(包括基因重编程)具有高度吸引力。用于多基因共表达的策略包括引入多种载体、在单一载体中使用多种启动子、融合蛋白、在基因之间的蛋白水解裂解位点、内部核糖体入口位点和“自裂解”2A肽。然而，存在对用于包括CAR、T细胞受体(TCR)、细胞因子、细胞因子受体、趋化因子受体和归巢受体(仅举例)的多个基因的组合表达的方法的未满足的需求。本公开内容满足了此需要。

发明概述

本公开内容的实施方案包括涉及多顺反子载体的方法和组合物，所述多顺反子载体包含各自由一个或多个限制酶位点侧接的至少两个、至少三个或至少四个顺反子，其中至少一个顺反子编码至少一种抗原受体。在一些情况下，顺反子中的两个、三个、四个或更多个被翻译为单一多肽并且裂解为分离的多肽。载体上的相邻顺反子可通过提供使经编码的多肽成为分离的分子的能力的位点分离。例如，载体上的相邻顺反子可通过自裂解位点(例如2A自裂解位点)分离。在一些情况下，顺反子中的每一个从载体表达分离的多肽。在特定情况下，载体上的相邻顺反子通过IRES元件分离。