[发明专利]同时解析多种抗体同种型的高特异性和灵敏度免疫吸附诊断测定

说明书

本发明提供了用于感染诊断的组合物和方法。抗体同种型、亚型和糖基化的模式提供了可鉴定出传染源以及患者对感染作出的反应的特征模式。可能受益于治疗性干预的患者可与反应可能性较低的患者区分开来。本发明还提供了疗法。

交叉引用

本专利申请案主张于2018年10月1日提交的第62/739,626号美国临时专利申请案以及于2019年6月17日提交的第62/862,397号美国临时专利申请案的优先权，上述专利申请案全文以引用方式并入本文中。

背景技术

病原体感染的临床检测需要直接检测来自受感染个体的生物学标本中的病原体或间接检测病原体特异性抗体。对于难以通过直接病原体测试检测到的感染(例如，在病原体数量非常少或难以进行组织采样的情况下)，检测病原体特异性抗体是一种更为可靠的诊断测试方法。

用于检测病原体特异性抗体的常规诊断法通常依赖于酶联免疫吸附测定法或蛋白免疫印迹法，其利用病原体裂解物或特定病原体蛋白/肽以与病原体特异性抗体结合，并使它们与病原体或病原体蛋白络合，从而进行下游检测。但是，这些策略具有明显的局限性。使用病原体裂解物时，针对所有种类的病原体所共有的高度保守的内部蛋白，引入了与抗体的非特异性相互作用。另一方面，仅使用一种特定蛋白或肽时，可以专门检测一种特殊亚种，这导致许多感染诊断被遗漏。此外，常规免疫吸附测定法显示并未如同在病原体表面上一般保持其天然构象的蛋白或蛋白肽。

另外，适用于病原体特异性抗体的常规间接测试通常仅测定大部分IgG或IgM和IgG，并且可能遗漏其他主要同种型，例如IgD、IgM、IgA、IgE和IgG，其可以进一步细分为进一步含有多种同种异型的亚类。例如，同种型IgA还含有亚型IgA2，其含有同种异型IgA2m3。不同的同种异型和亚类可以通过免疫系统发挥不同的下游效应子功能。

莱姆病是由细菌伯氏疏螺旋体所引起，这种细菌的数量可能非常少，并且难以直接从组织中采样。因此，莱姆病需要基于感染者所产生的抗体进行间接测试。但是，目前用于此目的的诊断法存在缺陷。感染莱姆病后，在接受当前方法测试的人中，有超过半数的人在感染后前几周的最关键早期治疗窗口期的测试结果呈阴性(参见Branda等人(2018))。

当前用于检测疏螺旋体感染的诊断方法是一种2级方案，其需要酶联免疫吸附测定(ELISA)或间接荧光抗体，然后(如有反应)用蛋白免疫印迹法测定免疫球蛋白M和免疫球蛋白G。这些测定法采用细菌裂解物，其无法维持关键的结合表位，并且通过显示胞内蛋白而无需引入非特异性。蛋白免疫印迹法组成部分进一步引入了对早期感染的主观解释和低灵敏度。

用于检测数量非常少或难以进行组织采样的病原体的改良方法具有重大临床意义。开发和改良灵敏且准确的诊断法对于更深入地了解这些疾病并实现靶向治疗方法的设计内容至关重要。本发明解决了这一问题。

出版物

Benach,J.L.等人，1986.莱姆病患者对螺旋体抗原产生的IgE应答.Zentralblattfür Bakteriologie,Mikrobiologie und Hygiene.A系列：医学微生物学，传染病，病毒学，寄生虫学，263(1–2)，第127–132页.

Bluth,M.H.等人，2007.患有莱姆病的儿童体内的IgE抗伯氏疏螺旋体组分(p18、p31、p34、p41、p45、p60)以及增加的血液中的CD8+CD60+ T细胞。斯堪的纳维亚免疫学杂志，65(4)，第376–382页.

Branda,J.A.等人，莱姆病血清学诊断测试取得进展已近在咫尺。临床传染病VIEWPOINTS·CID，2018，第1133页.

Irani,V.等人，2015.人IgG亚类的分子特性及其对设计针对传染病的治疗性单克隆抗体的意义。分子免疫学，67(2)，第171–182页.