[发明专利]干细胞疗法

说明书

一种包括扩增的细胞群的组合物可用于疗法，其中所述细胞已经通过包括以下的方法扩增：i)获得分离的HSPC群；ii)在存在组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC抑制剂)的情况下培养所述分离的HSPC群，以形成经过培养的群；iii)将以下添加到所述经过培养的HSPC群以形成扩增的细胞：具有式RNH(C_nH_2n)NH(C_nH_2n)SX的氨基硫醇化合物，其中R是氢、芳基、酰基或含有1个到7个碳原子的烷基，每个n的值为2到6，并且X是H或PO₃H₂；或其药学上可接受的盐。

技术领域

本发明涉及用于扩增造血干细胞和祖细胞的方法。本文中还公开了用于疗法的使用本发明方法扩增的多能细胞。

背景技术

造血干细胞和祖细胞移植(HSCT)是迄今为止最成功且使用最广泛的干细胞疗法。HSCT用于治疗其中常驻免疫系统已经受损的病状，如血液病症或化学放射治疗性处理。HSCT的使用也在基因疗法中得到临床证明并且期望通过新的基因组编辑技术得到进一步扩展。然而，挑战仍然存在，因为移植物必须与接受者是组织匹配的，从而使需求高于供应。

最初，用于移植的造血干细胞和祖细胞(HSPC)仅源自骨髓(BM)。最近，发现脐带血(UCB)也含有能够移植到骨髓中并贯穿接受者的整个寿命产生血细胞的HSPC。与更传统的BM相比，将UCB用作HSPC的来源以在HSCT中使用具有若干优点：UCB在使用前已经过测试和分组并且因此较容易获得，UCB还含有更多的未成熟干细胞，并且由于组织类型的不相容性而示出较不相关的移植物抗宿主疾病(graft versus host disease)。然而，使用源自UCB的细胞的移植物受到一个UCB单位中存在的细胞数量的限制。这种定量限制无法通过将多个UCB单位移植到单个受试者体内来克服，因为HSPC主要从仅一个UCB单位移植。因此，迄今为止，这些移植物已被限制在较小儿童中使用。

移植前，首先分离全脐血单位以丢弃红细胞，并且随后通过分选CD34+细胞或CD133+细胞进一步富集有核细胞。在许多祖/干细胞(包含造血系统的祖/干细胞)中发现标志物CD133。进一步地，已经证实其是长期重新填充细胞常驻的造血细胞的CD133+区室。因此，通过增加这些特定细胞类型的数量，其将大大提高移植并使UCB HSCT适用于治疗年龄较大的儿童和成人。不幸的是，使用传统培养方法，特征在于标志物CD133、CD34、CD90和CD49f的表达的HSC随着其增殖并伴随分化成具有限制效力的细胞类型而迅速耗竭。因此，在开发允许这些HSC扩增而不损害其干细胞特征的培养条件方面引起了很多关注。

存在几种通过尝试模拟这些细胞一般常驻的区位或环境而增加UCB单位中的细胞总数的策略。在20世纪70年代，确立了含有血清和特定细胞因子(主要是干细胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、白介素-3(IL3)、白介素-6(IL6)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF))的条件可以用于HSC的体外扩增。到90年代早期，进行了使用在含有SCF、G-CSF和MGDF的无血清培养基中扩增10天的UCB细胞的首次临床试验。这种扩增方法使总有核细胞(TNC)扩增56倍并使CD34+细胞扩增4倍。一起或间隔10天向患者输注一种受操纵级分和一种不受操纵级分。这个试验证实了离体扩增UCB单位的可行性和其整体安全性。在经过治疗的37名患者中，所有患者均示出了移植，尽管在30个月后仍然存活的只有12名。使用细胞因子的不同组合进行的进一步工作已经通向更加明确的体外扩增方案，其中一些已经在临床前模型中示出前景。这些方案包含使用SCF、TPO、fms样酪氨酸激酶3-配体(FLT3LG)、IL3和IL6以及最近的Wnt1、骨形态发生蛋白7(BMP7)、血管生成素样5(ANGPTL5)和胰岛素生长因子结合蛋白2(IGFBP2)。