[发明专利]蛋白质纯化方法

说明书

本发明提供了纯化蛋白质的方法，所述蛋白质以可增溶复合物的形式表达，其在增溶时产生正确折叠的和有活性的蛋白质。本发明的进一步方面涉及可以用于蛋白质的表达和纯化中的多肽。

相关申请的参考

本申请要求于2018年9月25日提交的美国临时申请No.62/735,861的优先权权益，将其全部公开内容通过引用并入本文中。

序列表的参考

本申请包括电子提交的文件名为“AbSci-005PCT_ST25.txt”的序列表，其于2019年9月20日创建且大小为63千字节(KB)，将其通过引用并入本文中。

技术领域

本发明属于分子生物学和生物技术制造的一般技术领域。更具体地，本发明属于重组蛋白生产的技术领域。

背景技术

重组蛋白或其他基因产物的有效表达需要使用一种系统，该系统的各个方面-表达构建体、宿主细胞株、生长条件和纯化方法-共同发挥作用以产生足够数量的所需产物，同时最小化材料和时间的花费。

当前用于工业化生产重组产物的许多表达系统依赖于昂贵的哺乳动物细胞培养，或利用蛋白质分泌到细菌细胞的周质中，这与在细菌胞质中表达基因产物相比更加限制了每细胞的产物量，并且更为耗时。在其他人开发的许多表达系统(其中将细菌胞质用作重组表达的优选细胞区室)中，常见的是所需的蛋白质用为不溶性包涵体产生(参见例如Chung等，“Recombinant production of biologically active giant grouper(Epinepheluslanceolatus)growth hormone from inclusion bodies of Escherichia coli by fed-batch culture”，Protein Expr Purif，2015年6月；110：79-88；doi：10.1016/j.pep.2015.02.012；Epub，2015年2月19日)。为了从包涵体中回收一些可溶的且正确折叠的蛋白质，必须进行另外的重折叠步骤(Yamaguchi和Miyazaki,Refolding techniquesfor recovering biologically active recombinant proteins from inclusionbodies,Biomolecules 2014年2月20日；4(1):235-251；doi:10.3390/biom4010235；综述)。对于含有二硫键的蛋白质，这些重折叠步骤通常包括使用还原剂将任何不当形成的二硫键(特别是可能造成蛋白质聚集成不溶包涵体的分子间二硫键)转化为巯基。

显然需要改进的表达系统及其使用方法以更有效地产生以正确折叠和可溶的形式的基因产物，如重组蛋白，并且其方式使得能够扩大到商业生产水平。

发明内容

本发明提供了纯化以可增溶复合物形式表达的蛋白质和其他基因产物的方法，所述可增溶复合物在溶解时产生正确折叠的活性基因产物，而无需使用还原剂。本发明的一个优点是能够以可增溶沉淀物的形式收集基因产物的可增溶复合物，从而使不需要的宿主细胞裂解物的成分丢弃在上清液中。例如，宿主细胞裂解物中存在基因产物的可增溶复合物时，此混合物可被视为悬浮液，其中可增溶复合物可以通过离心或其他方式沉淀成沉淀物，并从主要液体部分的宿主细胞裂解物分离。如本文使用的，术语“溶液”涵盖可以呈现出悬浮液性质的混合物。本发明的其他方面涉及可用于蛋白质表达和纯化的多肽前序列。