[发明专利]蛋白质纯化方法

权利要求书

1.一种用于产生一种或多种基因产物的方法，包括

提供包含至少一种在宿主细胞中表达的基因产物的第一溶液，其中所述第一溶液中的至少一种所述基因产物的至少一些可以通过在7000×g下离心来沉淀以形成可增溶沉淀物；和

将至少一种所述基因产物的至少一些置于增溶溶液中；和

从所述增溶溶液回收所述至少一种基因产物的至少一些，其中从所述增溶溶液回收的所述至少一种基因产物的量为所述第一溶液中存在的所述至少一种基因产物总量的至少50％；

其中所述至少一种基因产物不与还原剂接触。

2.根据权利要求2所述的方法，进一步包括

使所述第一溶液接受离心，其中将所述第一溶液分离成可溶性部分和沉淀物；和

从所述沉淀物回收所述至少一种基因产物的至少一些，其置于所述增溶溶液中。

3.一种用于产生一种或多种基因产物的方法，包括

提供包含至少一种在宿主细胞中表达的基因产物的第一溶液；和

使所述第一溶液接受离心，其中将所述第一溶液分离成可溶性部分和沉淀物；和

从所述沉淀物回收所述至少一种基因产物的至少一些；和

将从所述沉淀物回收的所述至少一种基因产物的至少一些置于增溶溶液中；和

从所述增溶溶液回收所述至少一种基因产物的至少一些，其中从所述增溶溶液回收的所述至少一种基因产物的量为所述第一溶液中存在的所述至少一种基因产物总量的至少50％；

其中所述至少一种基因产物不接触还原剂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述至少一种基因产物是形成至少一个二硫键的多肽。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述至少一种基因产物是缺乏信号肽的多肽。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述至少一种所述基因产物包括选自以下的多肽：(a)瘦素、美曲普汀、生长激素、人生长激素、包含胰岛素成熟链的氨基酸序列的多肽，和(b)(a)的任何多肽的片段。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述第一溶液是所述宿主细胞的裂解物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述宿主细胞的裂解物通过将宿主细胞接触溶菌酶产生。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述宿主细胞的裂解物通过机械裂解产生。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中宿主细胞是原核细胞。

11.根据权利要求10所述的方法，其中宿主细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)细胞。

12.根据权利要求1-11任一项所述的方法，其中所述宿主细胞已经过修饰以具有氧化性更高的胞质。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述宿主细胞的修饰导致选自trxB、gor、gshA和gshB的至少一种基因的缺陷性表达。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述宿主细胞进一步包括ahpC基因中的突变。

15.根据权利要求1-14任一项所述的方法，其中宿主细胞包含一个或多个表达构建体。

16.根据权利要求15所述的方法，其中至少一个所述表达构建体包含至少一个诱导型启动子。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述宿主细胞具有降低水平的至少一种编码蛋白质的基因的基因功能，所述蛋白质代谢所述至少一种诱导型启动子中至少一个的诱导剂。