[发明专利]改进的T细胞制造工艺

说明书

本文提供了改进的制造细胞的方法，所述细胞包括T细胞和CAR T细胞。本文还提供了使用结合膜过滤和氯化铵‑钾(ACK)缓冲液来使能够从血液获得的细胞如T细胞和CAR T细胞与其他血液组分分离的方法来制造所述细胞的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年11月16日提交的美国临时专利申请号62/768,579的权益，所述临时专利申请的全部内容以引用的方式整体并入本文。

1.技术领域

本发明涉及医学领域，特别是用于治疗癌症的细胞疗法的生产。

2.背景技术

基于表达人工受体(例如，嵌合抗原受体或T细胞受体(TCR))、多肽(所述多肽使所述T细胞靶向特定肿瘤相关抗原并提供初级信号传导且通常共刺激信号传导来活化并增加T细胞增殖)的T细胞的免疫疗法已成为越来越有前景的治疗方式，特别是对于已经用尽了其他线治疗的患者而言。然而，对于自体CAR T细胞疗法，细胞的制造仍然是费力且耗时的。因此，在本领域中需要改进的制造CAR T细胞的方法，所述方法将减少产生此类细胞的时间和费用。本文提供了这种改进的方法。

3.发明内容

在第一方面，本文提供了使用结合膜过滤和氯化铵-钾(ACK)缓冲液来使可从血液获得的细胞与其他血液组分分离的方法来制造所述细胞的方法。在第一实施方案中，本文提供了一种由来自受试者的外周血单核细胞(PBMC)制造细胞的方法，其中从所述受试者获得血液样品，所述方法包括以下步骤：(a)从所述血液样品获得血细胞，例如使用白细胞去除术或抽血以获得外周血单核细胞(PBMC)；(b)任选地冷冻所述血细胞并在解冻后获得所述PBMC，或者任选地获得并冷冻所述PBMC，随后在后续步骤之前解冻；(c)使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液分离所述PBMC；(d)通过离心洗涤所述PBMC；(e)任选地冷冻保存所述PBMC；(f)如果在步骤(e)中冷冻保存所述PBMC，则任选地使所述PBMC解冻；(g)使用膜过滤系统洗涤所述PBMC；(h)由所述PBMC制造所述细胞；以及(i)使用膜过滤系统洗涤所述细胞。在具体实施方案中，所述方法中的步骤(a)-(h)按顺序进行。在具体实施方案中，所述细胞是表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)。

在另一个实施方案中，本文提供了一种由来自受试者的外周血单核细胞(PBMC)制造表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)的方法，其中从所述受试者获得血液样品，所述方法包括以下步骤：(a)从所述血液样品获得PBMC；(b)使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液分离已从所述血液样品获得的PBMC；(c)通过离心洗涤所述PBMC；(d)任选地冷冻保存所述PBMC；(e)任选地使在步骤(d)中冷冻保存的PBMC解冻；(f)使用膜过滤系统洗涤所述PBMC；(g)由来自步骤(f)的PBMC制造所述CAR T细胞；以及(h)使用膜过滤系统洗涤来自步骤(g)的所述CAR T细胞。在具体实施方案中，所述方法中的步骤(a)-(h)按顺序进行。

在另一个实施方案中，本文提供了一种由来自受试者的外周血单核细胞(PBMC)制造表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)的方法，其中从所述受试者获得血液样品，所述方法包括以下步骤：(a)分离已从来自所述受试者的血液样品获得的PBMC，其中所述分离使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液；(b)通过离心洗涤所述PBMC；(c)任选地冷冻保存所述PBMC；(d)任选地使在步骤(c)中冷冻保存的PBMC解冻；(e)使用膜过滤系统洗涤所述PBMC；(f)由来自步骤(f)的PBMC制造所述CAR T细胞；以及(g)使用膜过滤系统洗涤来自步骤(f)的CAR T细胞。在具体实施方案中，所述方法中的步骤(a)-(g)按顺序进行。