[发明专利]改进的T细胞制造工艺

权利要求书

1.一种由来自受试者的外周血单核细胞(PBMC)制造表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)的方法，其中从所述受试者获得血液样品，所述方法包括以下步骤：

a.从所述血液样品获得PBMC；

b.使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液分离已从所述血液样品获得的所述PBMC；

c.通过离心洗涤所述PBMC；

d.任选地冷冻保存所述PBMC；

e.任选地使在步骤(d)中冷冻保存的PBMC解冻；

f.使用膜过滤系统洗涤所述PBMC；

g.由来自步骤(f)的PBMC制造所述CAR T细胞；以及

h.使用膜过滤系统洗涤来自步骤(g)的所述CAR T细胞。

2.一种由来自受试者的去除白细胞的血液样品中的外周血单核细胞(PBMC)制造表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)的方法，所述方法包括以下步骤：

a.使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液从所述去除白细胞的血液样品中分离所述PBMC；

b.冷冻保存来自步骤(a)的所述PBMC；

c.使来自步骤(b)的PBMC解冻；

d.使用旋转过滤系统洗涤来自步骤(c)的解冻的PBMC；

e.由来自步骤(d)的PBMC制造所述CAR T细胞；以及

f.使用膜过滤系统洗涤来自步骤(e)的所述CAR T细胞。

3.一种由来自受试者的血液样品中的外周血单核细胞(PBMC)制造表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR T细胞)的方法，所述方法包括以下步骤：

a.使用膜过滤系统和氯化铵-钾(ACK)缓冲液从所述血液样品中分离所述PBMC；

b.将来自步骤(a)的所述PBMC冷冻保存并解冻；

c.使用膜过滤系统洗涤来自步骤(b)的解冻的PBMC；

d.由所述PBMC制造所述CAR T细胞；以及

e.使用旋转膜过滤系统洗涤所述CAR T细胞。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述膜过滤系统中的任一个或所有膜过滤系统是旋转膜过滤系统。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述旋转膜过滤系统是LOVO自动化细胞加工系统。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述ACK缓冲液包含50-300mM氯化铵、5-25mM碳酸钾和0.05-0.25mM EDTA钠。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述ACK缓冲液包含150mM氯化铵、10mM碳酸钾和0.1mM EDTA钠。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中与使用密度梯度离心代替每次使用膜过滤的相同方法相比，所述方法使来自所述PBMC的血小板和红细胞的减少程度提高了18％-36％。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中与使用密度梯度离心代替每次使用膜过滤的相同方法相比，所述方法使在CAR T细胞制造后CAR T细胞的回收率提高了17％-36％。