[发明专利]从奶、初乳和酸乳清或甜乳清中制备高纯度乳铁蛋白和乳过氧化物酶的方法

权利要求书

1.一种从一来源物质中制备包含乳铁蛋白和/或乳过氧化物酶的馏分的方法，所述来源物质含有这些蛋白中的至少一种，其中所述来源物质选自下组：奶、初乳、酸乳清或甜乳清，采用具有强阳离子交换性能的整体柱的色谱分离工艺，在所述分离工艺中，在将所述来源物质上样至所述柱后采用pH梯度或pH和盐梯度组合洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述pH梯度在约4.0到约pH8.0的pH范围内开始。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，pH梯度在约pH8至pH13的范围内终止。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，在将所述来源物质上样至色谱柱之前，对所述来源物质进行过滤。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，在约为5至55mS/cm的范围内的较高电导率，pH值为约pH8至约pH值11的范围内，特别是约为pH8.9至pH10或约pH6.6至pH7.5，收集洗脱的馏分A。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，在约为5至55mS/cm的范围内的较高电导率，在pH值为约pH＞10.4至约12，特别是约pH11至约11.7，或约pH9.6至约10.7，收集洗脱的馏分B。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，色谱分离过程包括以下步骤

(i)将来源物质的pH值调整到低于pH7，特别是低于pH6.5的数值；

(ii)使步骤(i)的所述来源物与具有强阳离子交换性能的整体柱接触；然后

(iii)让pH梯度缓冲液流经该柱，从而提高pH值；以及

(iv)收集馏分A，该馏分在约5至55mS/cm的高电导率范围内，约pH8至约pH11，特别是约pH8.0至约pH10，优选约pH8.2至约pH10，更优选约pH8.9至约pH10，或约pH6.6至约pH7.5的pH范围内洗脱，通常含有乳过氧化物酶；和/或

(v)收集馏分B，该馏分在约5至55mS/cm的高电导率范围内，约pH10至约pH12.0，优选约pH＞10.4至约12，更优选约pH＞11.0至约pH12.0，特别是约pH11至约11.7，或约pH9.6至约pH10.7的pH范围内洗脱，通常包括乳铁蛋白；

(vi)可选地，进一步处理馏分A和/或B，特别是通过中和、浓缩、保存等处理。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤(ii)之前对所述来源物质进行过滤，或者在步骤(ii)之前用平衡缓冲液平衡所述整体柱，该平衡缓冲液的pH值约为pH＜7，特别是约为pH＜6.5。

9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述具有强阳离子交换性能的整体柱选自下组：-SO₃H改性整体柱、-COOH改性整体柱、-OSO₃H改性整体柱或-OPO₃H改性整体柱。

10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述盐的梯度是通过盐的浓度进行的，特别是盐的梯度对应于约5mS/cm至约55mS/cm范围内的电导率。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(iii)或(iv)之前，用权利要求8的所述平衡缓冲液冲洗色谱柱。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其特征在于，含有乳铁蛋白和乳过氧化物酶的馏分被干燥，特别是通过喷雾干燥。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其特征在于，乳铁蛋白的纯度为＞90％，乳过氧化物酶的纯度为＞50％，特别是其中乳铁蛋白C值为＞50，乳铁蛋白A值为＞1。