[发明专利]嵌合黄病毒丽沙病毒疫苗

说明书

本发明描述了在E/NS1基因间区域包含丽沙病毒G蛋白的嵌合黄病毒构建体。

技术领域

本发明涉及基于嵌合黄病毒的疫苗。本发明进一步涉及针对狂犬病的疫苗。

背景技术

在人类中使用的狂犬病疫苗是纯化的细胞培养物和包含灭活的狂犬病病毒(RABV)的基于鸡胚的狂犬病疫苗(CCEEV)。

这些疫苗是灭活的病毒疫苗，其要求多剂量方案，生产和保持它们需要冷链且成本高。这些疫苗不能预防处于疫区中的人中的主要目标群体中的人类狂犬病。此外，通过预防性疫苗接种所诱导的免疫保护作用相对迅速地减小，这涉及需要利用免疫球蛋白(RIG)和疫苗组合方案的暴露后治疗。

狂犬病病毒糖蛋白G(RabG)负责细胞粘附和膜融合，是被靶向用于疫苗开发的关键免疫原。狂犬病病毒糖蛋白G及其表位的综述参见Kuzmina等人，(2013)J antivirantiretrovir.5:2 37-43。

Bonaldo等人，(2014)Human Vacc.Immunother.10,1256–1265综述了黄热病病毒(YFV)嵌合构建体，其中非黄病毒抗原被插入到YFV基因组中。

已经采用了涉及复制缺陷性疫苗平台RepliVax^TM(RV)西尼罗病毒(WNV)的方式来获得狂犬病疫苗(RV-RabG)(Giel-Moloney等人，(2017)Vaccine.35(49PtB),6898-6904)。在此方式中，通过在不同的WN缺失变体中插入狂犬病病毒糖蛋白G基因(C、prME或CprME WN基因用RabG基因交换)来生成几种RV-RabG构建体。使用全长RabG蛋白，包括在C-末端处具有2A自剪切元件的天然RabG信号序列。

这些构建体需要体外转录和在表达结构性WN C-prM-E蛋白的幼仓鼠肾(BHK)辅助细胞(HC)中转染，需要所述结构性WN C-prM-E蛋白用来将RV-RabG复制子包装为用作疫苗的单组分假感染性病毒(sPIV)。这些PIV诱导针对狂犬病和WN的特异性抗体反应。

黄热病病毒17D已经被用作用于拉沙病毒糖蛋白(GPC)或其亚基G1和GP2的载体(Bredenbeek等人，(2006)Virology 345,299-304和Jiang等人，(2011)Vaccine.29,1248-1257)。在这些构建体，GP基因(缺少信号肽，SSP)(或GP1序列或GP2序列)被插入到YF-E/NS1之间。这些构建体体在插入物融合体的C末端处具有源自YF-E(YF-E的23个C末端疏水氨基酸)、WNV-E或人工设计的序列的序列。这些构建体需要在细胞中转染，并且由它们得到的病毒用作疫苗。

RepliVax^TM-RabG(RV-RabG)构建体不能直接用作疫苗，其要求在BHK辅助细胞(HC)中首先生成假感染性病毒(PIV)，BHK辅助细胞反式地供应从WNV主链缺失的蛋白以获得用来进行疫苗接种的PIV。这涉及高的生产成本以及要求冷链来保存PIV。

鉴于使用YFV17D作为载体表达糖蛋白前体，利用此重组病毒的主要问题是不稳定性，该不稳定性不允许根据疫苗生产的要求放大该技术。

发明内容

本发明描述了嵌合黄病毒构建体，该构建体在E/NS1基因间区域中包含丽沙病毒(lyssavirus)G蛋白。