[发明专利]细胞分选系统及使用方法

说明书

本公开的主题提供用于分离表达特定构建体的细胞的方法和系统。在某些非限制性实施方式中，系统包含膜结合多肽和能够与膜结合多肽二聚化的可溶性多肽。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年8月16日提交的美国临时申请第62/765,129号和于2019年1月29日提交的美国临时申请第62/798,206的优先权，其各自的内容整体并入本文以作参考，并要求其各自的优先权。

概述

本公开的主题提供用于分离表达特定构建体的细胞的方法和组合物。其涉及包含膜结合多肽和可溶性多肽的系统及其使用方法。

背景技术

将大量遗传信息稳定整合到原代T细胞中代表了当前细胞工程的局限性。当病毒载体插入物的大小超过病毒的包装极限时(逆转录病毒约为6-8kb，慢病毒约为10-12kb)，逆转录病毒和慢病毒都显示出病毒滴度的显著降低。病毒滴度低导致转导效率低以及单位细胞的拷贝数整合低，导致基因构建体表达不佳。因此，仍然需要包含多个载体的基因表达系统，并且需要分离包含此类系统的细胞。

发明内容

本公开的主题提供膜结合多肽。该膜结合多肽可用于分选细胞。

在某些实施方式中，膜结合多肽包含：a)跨膜结构域，和b)细胞外结构域，其包含第一二聚化结构域和能够在细胞表面与第一二聚化结构域二聚化的第二二聚化结构域。在某些实施方式中，第一和第二二聚化结构域的每一个包含亮氨酸拉链结构域。在某些实施方式中，第一二聚化结构域包含如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列，第二二聚化结构域包含如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，细胞外结构域还包含在第一二聚化结构域和第二二聚化结构域之间的接头。在某些实施方式中，接头包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，细胞外结构域还包含在第一二聚化结构域和跨膜结构域之间的间隔区/铰链结构域。在某些实施方式中，间隔区/铰链结构域包含被抗体识别的表位，其中抗体与表位的结合介导表达膜结合多肽的细胞的耗竭。在某些实施方式中，间隔区/铰链结构域包含Thy1.1分子或截短的EGFR分子(EGFRt)。在某些实施方式中，Thy1.1分子包含或具有如SEQ ID NO：68所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，EGFRt包含或具有如SEQ IDNO：70所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，细胞外结构域还包含共刺激配体。在某些实施方式中，共刺激配体选自肿瘤坏死因子(TNF)家族成员、免疫球蛋白(Ig)超家族成员及其组合。在某些实施方式中，TNF家族成员选自4-1BBL、OX40L、CD70、GITRL、CD40L、CD30L及其组合。在某些实施方式中，共刺激配体是4-1BBL。

在某些实施方式中，Ig超家族成员选自CD80、CD86、ICOSLG及其组合。在某些实施方式中，共刺激配体是CD80。

在某些实施方式中，细胞外结构域还包含分子的显性负型。在某些实施方式中，该分子选自免疫检查点分子的抑制剂、肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)成员和转化生长因子β(TGFβ)受体。在某些实施方式中，免疫检查点分子选自PD-1、CTLA-4、B7-H3(也称为“CD276”)、B7-H4、BTLA、TIM-3、LAG-3、TIGIT、LAIR1、CD200、CD200R、HVEM、2B4、CD160、半乳凝素9及其组合。在某些实施方式中，免疫检查点分子是PD-1。在某些实施方式中，TNFRSF成员选自Fas、肿瘤坏死因子受体、OX40、CD40、CD27、CD30、4-1BB(也称为“CD137”)及其组合。在某些实施方式中，显性负受体包含TGFβRII的细胞外结构域或其片段。

在某些实施方式中，膜结合多肽还包含细胞内结构域。在某些实施方式中，细胞内结构域包含CD3-ζ结构域、共刺激结构域、自杀基因或其组合。