[发明专利]用于减少双特异性抗体的聚集的方法

说明书

本文披露的本发明涉及通过在解冻后将抗体保持在某些温度下用于减少由在冷冻条件下储存而产生的双特异性抗体的聚集，例如减少双特异性T细胞接合(BiTE)抗体构建体的聚集的方法。

本申请要求2018年10月1日提交的美国临时申请号62/739,542的权益，将其通过引用并入本文。

技术领域

本申请涉及用于减少双特异性抗体的聚集的方法。更具体地，本申请涉及用于减少由在冷冻条件下储存而产生的本文披露的双特异性抗体(例如双特异性T细胞接合抗体)的聚集的方法。

背景技术

治疗性蛋白质如抗体是针对患者的一种重要的药物类别。典型地，治疗性蛋白质在真核细胞中产生并大量纯化。由于蛋白质对温度变化敏感，因此将这些治疗性蛋白质的原料药在-20℃至-80℃的温度范围下的冷冻条件下储存和运输。冷冻延长了治疗性蛋白质的保质期，并且为安排将蛋白质最终配制和填充到市售的产品包装中提供了灵活性。用于储存和运输的操作基础设施和物流在该范围内的较高温度下是有利的。

冷冻/解冻过程可能是蛋白质的应激源。例如，水在蛋白质原料药的冷冻过程中结晶，这可能导致蛋白质分子达到起始水平的几倍的浓度水平。浓度变化可能导致蛋白质热力学稳定性的丧失，导致折叠事件并造成聚集。参见例如18Lam Philippe等人,Quality byDesign for Biopharmaceutical Drug Product Development[生物药物产品开发的设计质量],第159-189页(Jameel F.等人编辑,2015)。解冻过程可能涉及类似的应激，并且它们可能由于及时融化冰所需的较高温度而加剧。同上。因此，当包含治疗性蛋白质的原料药在冷冻条件下储存和/或运输时，蛋白质聚集体(例如，高分子量(HMW)聚集体)可能由于冷冻/解冻过程产生。然而，原料药中聚集体的存在是不期望的，因为聚集体可能负面影响蛋白质的稳定性、免疫原性和效力。需要用于减少在冷冻条件下储存产生的蛋白质聚集的方法。

发明内容

本文提供了用于减少由在冷冻条件下储存而产生的双特异性抗体(特别是双特异性T细胞接合抗体(BiTE))的聚集的方法。本申请涉及出人意料的发现，即在解冻后，将双特异性抗体在某些温度下保持一段时间减少了在冷冻条件下储存形成的聚集体。

在一个实施例中，本文披露了用于减少双特异性抗体的聚集体的方法，该方法包括将解冻的双特异性抗体在约5℃至约45℃的温度下保持至少4小时，其中在解冻前，该双特异性抗体已储存在约-20℃至约-40℃的温度下。在一个实施例中，将该解冻的双特异性抗体在该温度下保持约4小时至约96小时的时间段。在一个实施例中，将该解冻的双特异性抗体在约10℃至约30℃的温度下保持约10小时至约48小时的时间段。在一个实施例中，将该解冻的双特异性抗体在约10℃至约30℃的温度下保持8小时至48小时的时间段。

在一个实施例中，将该双特异性抗体在约5℃至约45℃的温度下解冻。在一个实施例中，在解冻前，该双特异性抗体已在约-20℃至约-35℃的温度下储存，在另一个实施例中，在解冻前，该双特异性抗体已在约-30℃下储存。在一个实施例中，聚集体包含高分子量(HMW)聚集体。在一个实施例中，HMW聚集体包含双特异性抗体的二聚体。在一个实施例中，双特异性抗体在保持期后包含低于约1％的HMW聚集体，在另一个实施例中，双特异性抗体在保持期后包含低于约0.5％的HMW聚集体。