[发明专利]通过利用混合原料的全发酵进行的寡糖的发酵生产

权利要求书

1.一种用于生产乳糖或在其还原端包含半乳糖-β1,4-葡萄糖部分的目的寡糖的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞具有：

-至少一种葡萄糖转运蛋白，其用于将葡萄糖从培养基中转运到微生物细胞的细胞质中；

-UDP-半乳糖生物合成途径；和

-至少一种β-1,4-半乳糖基转移酶，其能够将游离的葡萄糖半乳糖基化以在细胞内产生乳糖。

2.根据权利要求1所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述至少一种葡萄糖转运蛋白选自葡萄糖促进扩散蛋白和葡萄糖转运通透酶。

3.根据权利要求1或2所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞表达或过表达至少一种编码葡萄糖转运蛋白的基因，优选至少一种选自glf、galP及其功能性变体的基因。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞具有磷酸葡萄糖变位酶、UTP-葡萄糖-1-磷酸-尿苷酰基转移酶和UDP-葡萄糖4-差向异构酶。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述β-1,4-半乳糖基转移酶由选自以下的基因编码：脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)lgtB、嗜沫聚集杆菌(Aggregatibacter aphrophilus)lex-1、多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)galTpm1141及其功能性变体。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞具有至少一种额外的糖基转移酶，优选地选自以下的糖基转移酶：岩藻糖基转移酶、唾液酸转移酶、葡糖胺基转移酶和半乳糖基转移酶。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞包含葡萄糖转运磷酸转移酶系统。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞具有果糖转运蛋白。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞具有果糖特异性磷酸转移酶系统，并且其中所述细胞还包含1-磷酸果糖激酶。

10.根据权利要求8所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞包含果糖激酶-6活性和6-磷酸果糖激酶-1活性。

11.根据权利要求9所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞包含果糖-1,6-二磷酸酶。

12.根据权利要求9或11所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞包含其葡萄糖-6-磷酸异构酶的缺失或功能性失活。

13.根据权利要求6至12中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述额外的糖基转移酶为岩藻糖基转移酶，并且其中所述微生物细胞具有甘露糖-6-磷酸异构酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸-鸟苷酰基转移酶、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的遗传工程化的微生物细胞，其中所述微生物细胞包含从细胞中输出目的寡糖的输出蛋白或通透酶，优选糖外排转运蛋白。