[发明专利]用于肾脏移植后BK病毒性肾病风险分层的方法

权利要求书

1.一种评估肾脏移植的患者中发生BK病毒(BK-v)肾病的风险的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量所述患者的生物样本中BK-v的病毒载量，

b)测量来自所述患者的生物样本中BK-v病毒特异性CD4⁺或CD8⁺记忆T细胞应答的归一化强度，所述归一化是相对于步骤a)中测量的BK-v病毒载量进行的，和

c)确定肾脏供体与所述患者的HLA I和II之间的不相容性的数量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中然后汇编三个参数a)、b)和c)，以创建患者将发生BK病毒肾病的风险分层指数。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤a)中通过对来自所述患者的全血或血浆样本进行定量PCR来测量BK-v病毒载量。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中通过以下确定步骤b)中测量的BK-v特异性CD4⁺或CD8⁺记忆T细胞的应答：使所述患者的外周血单个核细胞与BK-v病毒肽接触、以及在培养4至7天后，通常在培养5天后，评估存在于所述单个核细胞中的T细胞的增殖。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在所述肽存在时，通过培养4至7天后，通常在培养5天后，确定具有稀释的增殖标记物例的CD4⁺T细胞的比例，来测量所述增殖；例如，所述增殖标记物是CFSE。

6.根据权利要求4所述的方法，其中在所述肽存在时，通过培养4至7天后，通常在培养5天后，确定具有稀释的增殖标记物例的CD8⁺T细胞的比例，来测量所述增殖；例如，所述增殖标记物是CFSE。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中在以下情况下得出发生BK病毒(BK-v)肾病的风险高的结论：

a)与每mL血液中10³拷贝BK-v病毒的病毒载量相关，

b)BK-v特异性CD4⁺或CD8⁺记忆T细胞应答的归一化强度小于或等于100强度测量单位，并且

c)所述患者与移植肾脏的供体之间的不相容性数量小于或等于5。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在以下情况下得出发生BK病毒(BK-v)肾病的风险低的结论：

a)与每mL血液中10³拷贝BK-v的病毒载量相关，

b)BK-v特异性CD4⁺或CD8⁺记忆T细胞应答的归一化强度严格大于100强度测量单位，并且

c)所述患者与移植物供体之间的不相容性数量严格大于5。

9.一种在改变免疫抑制治疗后用于评估肾脏移植患者对血液BK-v复制的应答的体外方法，其特征在于，在移植后以固定的时间间隔重复权利要求1至8中定义的方法。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在每次改变治疗之前和之后重复权利要求1至8中定义的方法。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，大约每3至6个月重复权利要求1至8中定义的方法。

12.能够并设计用于在全血中实施权利要求1至11所述方法的试剂盒，所述试剂盒包含：

a)用于进行BK-v病毒定量PCR的试剂，和

b)用于对全血进行权利要求4至6所述的免疫学方法的试剂。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述试剂b)包含BK-v肽序列或多克隆淋巴细胞刺激肽序列，以及任选地淋巴细胞标记试剂。

14.根据权利要求12所述的试剂盒，其包含：

a)用于扩增BK-v基因组的部分的特异性引物，以及

b)BK-v肽序列，优选重叠肽的混合物，例如BKV VP1或BKV LT和/或多克隆淋巴细胞刺激肽序列，

以及，任选地

c)通过DNA提取进行定量PCR所需的试剂，和/或

d)用于淋巴细胞标记的试剂。