[发明专利]肝-胆-胰组织和其制备方法

说明书

本文公开肝‑胆‑胰类器官(“HBPO”或“HBP类器官”)组合物，以及制备和使用肝‑胆‑胰类器官组合物的方法。所述公开的组合物可具有两种或更多种选自以下的功能：肝组织功能、胆组织功能、外分泌胰功能，和内分泌胰组织功能。还公开使用所述肝‑胆‑胰类器官组合物治疗个体的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年7月26日提交的题为“从在人体内的前肠道-中肠道边界建模肝-胆-胰器官发生”的62/703,559的优先权和权益，其内容出于所有目的以其全文并入。

背景技术

器官发生是一个复杂且互连的过程，由多种边界组织相互作用统筹^1-7。然而，迄今为止，尚不清楚各个相邻组分如何协调以建立完整的多器官结构。因此，干细胞培养中的多器官整合已为未解决的关键挑战。具体来说，获得具有多于一种组织类型的结构上和功能上整合的类器官是所属领域中未满足的需求。更特别的是，由于技术复杂性，肝-胆-胰(HBP)系统的模式化和平衡的器官发生尚未在组织培养中成功建模，阻碍详细的机理研究^16、17。本公开试图解决在所属领域中的一个或多个前述需要。

发明内容

本文公开肝-胆-胰类器官(“HBPO”或“HBP类器官”)组合物，以及制备和使用肝-胆-胰类器官组合物的方法。公开的组合物可具有两种或更多种选自以下的功能：肝组织功能、胆组织功能、外分泌胰功能，和内分泌胰组织功能。还公开使用肝-胆-胰类器官组合物治疗个体的方法。

附图说明

所属领域的技术人员将理解，下文描述的附图仅用于说明性目的。附图不旨在以任何方式限制本教示内容的范围。

图1A-1G。边界类器官生成多内胚层结构域。1A。用于从iPSC建立肝-胆-胰(HBP)类器官(“HBPO”)的示意性概述。人PSC分化成前部或后部肠道细胞。将细胞解离成单个细胞并重新聚集以形成前部/后部肠道球体，并且在基质胶中生成前部-后部边界类器官。基质胶包埋从边界类器官开始多器官规格和内陷。1B。经由SOX2+前部和CDX2+后部肠道球体的融合的边界类器官的生成。SOX2和CDX2的表达通过呈红色的SOX2、呈绿色的CDX2和呈白色的DAPI进行整体免疫染色，流式细胞术检测每个群的百分比作为进样口数，并通过qPCR证实。数据为平均值±标准差；n＝3个独立实验。未配对的双尾学生t检验。1C。从第8天到第11天人iPSC衍生的前部和后部类器官混合体的示踪。上排：亮场。中排：呈红色的SOX2、呈绿色的PDX1、呈蓝色的CDX2和呈白色的DAPI的整体免疫染色。下排：呈蓝色的CDX2、呈绿色的HHEX、呈红色的PDX1和呈白色的DAPI的整体免疫染色。箭头：PDX1和HHEX阳性区域。1D。在对PDX1染色的边界类器官免疫荧光的每个区中检测到PDX1阳性细胞的频率。1E。PDX1阳性细胞在每个边界类器官中的位置。Y轴示出与DAPI染色的总细胞数相比，在每个区中PDX1阳性细胞的百分比。f。在第11天以各种组合(前部-后部(AP)(n＝4)、前部到前部(AA)(n＝3)和后部-后部(PP)(n＝3))融合的类器官的HHEX和PDX1阳性细胞的百分比。Y轴示出与DAPI染色的总细胞数相比，性细胞的百分比。数据为平均值±标准差*P0.05，**P0.01；单向方差分析。g。从第8天(D8)到第12天(D12)，随时间过程的边界类器官的转录组学表征。解剖、分离前部(A)、边界(B)和后部(P)结构域，并将其应用于RNA测序，如左代表性图像指示(前部肠道球体通过GFP标记，并且后部肠道球体通过RFP标记)。前部、边界和后部结构域分别示出报告的前部前肠、肝脏/胆/胰腺原基和中/后肠道标志物的基因集的丰富^31,32。比例尺50μm(1B)，100μm(1C)，50μm(1G)。