[发明专利]新型甲状腺过氧化物酶自身抗体免疫测定

说明书

本文公开了用于检测来自受试者的生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体和/或诊断受试者中的甲状腺疾病的免疫测定法。所公开的免疫测定法采用重组食蟹猴甲状腺过氧化物酶(rTPO)且评价抗甲状腺过氧化物酶抗体诱导的包含固体支持物和rTPO的复合物的形成或破坏的水平。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年7月2日提交的美国临时申请号62/693,434的优先权，所述申请以其整体通过引用并入本文。

技术领域

本文公开了检测来自受试者的生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的方法和诊断所述受试者中的甲状腺疾病的方法。

背景

甲状腺过氧化物酶(TPO)是在甲状腺滤泡细胞的顶膜中发现的膜结合糖蛋白。TPO氧化碘离子，用于添加至甲状腺球蛋白酪氨酸残基上，以产生关键的甲状腺激素T₃和T₄。TPO也是甲状腺疾病中的自身抗原，所述甲状腺疾病包括例如桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯氏病、萎缩性甲状腺炎、原发性混合瘤(mixedema)和女性中的产后甲状腺炎。抗TPO自身抗体水平升高是甲状腺疾病的危险因素。

当前用于检测患者抗TPO自身抗体的免疫测定法利用人来源的TPO，其从人尸体甲状腺组织获得。然而，人来源的TPO价格昂贵，难以纯化且产量低，并且批次间可以差异很大。当前的免疫测定法进一步需要多种非人二抗。

概述

本文公开了检测来自受试者的生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的方法。所述方法可以包括将来自所述受试者的生物样品与固体支持物、未标记的重组食蟹猴甲状腺过氧化物酶(rTPO)和标记的食蟹猴rTPO孵育。在所述抗甲状腺过氧化物酶抗体存在的情况下，形成包含所述标记的食蟹猴rTPO、所述未标记的食蟹猴rTPO和所述固体支持物的复合物。所述方法进一步包括检测所述复合物，其存在表明在所述生物样品中存在所述抗甲状腺过氧化物酶抗体。在一些实施方案中，所述方法可以是如本文所述的“抗原桥”测定法。

还提供了检测来自受试者的生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的方法，所述方法包括将来自所述受试者的生物样品与固体支持物、食蟹猴rTPO和抗人二抗孵育。在所述抗甲状腺过氧化物酶抗体存在的情况下，形成包含所述固体支持物、所述食蟹猴rTPO和所述抗人二抗的复合物。所述方法进一步包括检测所述复合物，其存在表明在所述生物样品中存在所述抗甲状腺过氧化物酶抗体。在一些实施方案中，所述方法可以是如本文所述的“rTPO捕获”测定法。在一些实施方案中，所述方法可以是如本文所述的“IgG类捕获”测定法。

进一步提供了检测来自受试者的生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的方法，所述方法包括将来自所述受试者的生物样品与固体支持物、未标记的抗TPO抗体、食蟹猴rTPO和标记的抗TPO抗体孵育，和检测所述抗甲状腺过氧化物酶抗体，所述检测包括分析复合物形成的减少，所述复合物包含所述固体支持物、所述未标记的抗TPO抗体、所述食蟹猴rTPO和所述标记的抗TPO抗体。所述生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的存在减少复合物的形成，所述复合物包含所述固体支持物、所述未标记的抗TPO抗体、所述食蟹猴rTPO和所述标记的抗TPO抗体。复合物的存在与所述生物样品中的抗甲状腺过氧化物酶抗体的存在成反比。在一些实施方案中，所述方法可以是如本文所述的“竞争”测定法或“抑制”测定法。

本文进一步公开了诊断受试者中的甲状腺疾病的方法。所述方法可以包括将来自所述受试者的生物样品与固体支持物、未标记的重组食蟹猴甲状腺过氧化物酶(rTPO)和标记的食蟹猴rTPO孵育。在所述生物样品中存在抗甲状腺过氧化物酶抗体的情况下，形成包含所述标记的食蟹猴rTPO、所述未标记的食蟹猴rTPO和所述固体支持物的复合物。所述方法进一步包括，如果形成所述复合物，则诊断所述受试者具有所述甲状腺疾病。