[发明专利]乙酰氨基酚测定法

说明书

本申请公开了用于测定样品中存在的对氨基苯酚的浓度的测定法。更具体地说，本发明涉及用于确定样品中存在的对乙酰氨基酚浓度的基于酶的测定法的改进。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年5月3日提交的美国临时专利申请62/666,282的权益，其全部内容通过引用合并于此。

技术领域

总体而言，本发明涉及测定样品中存在的对氨基苯酚的浓度的测定法。更具体地说，本发明涉及用于确定样品中存在的对乙酰氨基酚浓度的基于酶的测定法的改进。

背景技术

药物毒性是急性肝衰竭的主要原因。在评估肝衰竭时，临床实验室在诊断中起着至关重要的作用，由此可以及时开始适当的治疗。

对乙酰氨基酚(N-乙酰基-对氨基苯酚)长期被规定为镇痛药和解热药。它无需处方即可广泛获得，并且是许多常见治疗制剂(例如感冒药物和流感药物)中的活性成分。这种药物的广泛使用使它在出现肝功能不全的患者中被怀疑是肝毒性药物。

尽管对乙酰氨基酚的治疗剂量很少引起不良反应，但据报道，长期过度使用对乙酰氨基酚会导致肝毒性和肾毒性。摄入过量的对乙酰氨基酚会导致肝脏中谷胱甘肽的耗尽和有毒代谢产物的积累，从而可能导致严重的甚至致命的肝衰竭。

当过量摄入对乙酰氨基酚时，高反应性中间体N-乙酰基-对-苯并醌亚胺在肝脏中蓄积。该中间体与肝脏中的硫醇基(thiol)，特别是谷胱甘肽发生反应。谷胱甘肽被氧化成谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。肝脏中GSSG水平过高会导致坏死。据报道，对乙酰氨基酚的毒性在血清浓度为约20mg/dL(1324μmol/L)以上时出现。

谷胱甘肽前体N-乙酰半胱氨酸(NAC)通常用作对乙酰氨基酚过量的解毒剂。服用的NAC中约有70％在肝脏中代谢。据信，NAC至少由于以下原因而起到解毒剂的作用：它是谷胱甘肽的前体，它是一种强大的抗氧化剂，并增加了肝脏中GSSG还原酶的效率。据信，NAC的施用至少部分地通过补充谷胱甘肽贮存并防止肝脏中GSSG的积累来最小化或防止由对乙酰氨基酚过量引起的损害。

通常在整个治疗过程中以初始负荷剂量施用高浓度的NAC，然后维持NAC的水平。负荷剂量可导致NAC的血清水平为2000mg/L或更高，维持水平通常为800mg/L至1000mg/L。期望在整个NAC治疗过程中监测对乙酰氨基酚水平，以确保维持适当的治疗水平，同时避免不必要或过度地暴露于NAC。

意外以及故意使用过量的对乙酰氨基酚的发生率显著增加。对乙酰氨基酚过量的诊断和治疗需要及早发现并准确测量体内药物。必须快速、准确地确定载板上的对乙酰氨基酚的浓度，以便临床医生可以向患者快速施用适当治疗剂量的NAC。对用于确定生物样品中对乙酰氨基酚浓度的快速、可靠和健康(robust)的临床测定法有很高的需求。

用于确定生物样品中对乙酰氨基酚水平的已知方法包括例如各种色谱法和分光光度法。

气液色谱法和高效液相色谱法已被证明是测定生物样品中对乙酰氨基酚水平的可靠而准确的方法。

但是，两者都是冗长的过程，需要昂贵的仪器和高水平的技术才能执行。这种方法并不特别适合需要快速结果的Stat实验室。

差示分光光度法已被广泛使用，但是该方法需要费时的溶剂萃取，这在临床测定中是不希望的。较快速的分光光度法通常无法提供所需的特异性。

比色技术包括简单的比色法以及基于酶的比色法。也可以使用各种基于免疫的测定法，但是这些测定法往往更加昂贵，因此不太理想，特别是在临床环境中。

尽管与基于免疫的测定法相比，基于酶的测定法方便且经济，但它们通常不可靠，因为它们易于干扰患者样品中经常存在的生物分子，例如胆红素和血红蛋白。患者样品中此类分子水平的升高可能会导致假阳性结果(例如，参见Bertholf等人，2003年)，这有可能导致误诊和不当的治疗选择或剂量。

在治疗水平的NAC的存在下，已知的酶测定法也受到干扰。因此，由于对乙酰氨基酚的测定水平不准确，因此在NAC治疗过程中，酶法测定通常不能用于监测对乙酰氨基酚水平。这是已知的酶促对乙酰氨基酚测定法的显著缺点。