[发明专利]蛋白质的制造方法

说明书

本发明提供一种用于廉价且有效地以微生物学的方式制造蛋白质的方法。一种蛋白质的制造方法，其包括：在糖基胺的存在下培养微生物的步骤。

技术领域

本发明涉及一种使用微生物的蛋白质的制造方法。

背景技术

由于丝状菌生产多种纤维素酶和木聚糖酶，因此，作为植物性多糖的分解菌备受关注。其中，木霉(Trichoderma)可以同时且大量地生产纤维素酶和木聚糖酶，因此，作为用于制造纤维素酶系生物质分解酶的微生物被进行研究。

在微生物的培养中，目前，通用葡萄糖作为碳源。但是，在葡萄糖存在下，通过被称为分解代谢物阻遏的控制机理，产生微生物的物质生产率的降低或饱和。报道有广域控制型转录因子CreA、或CreB、CreC、CreD等参与曲霉(Aspergillus)属等丝状菌的分解代谢物阻遏(专利文献1)。有可能可以通过这些转录因子的控制而调节曲霉的分解代谢物阻遏，但还尚未得到充分的成果。关于木霉，也正在进行分解代谢物阻遏的机理分析(专利文献2、非专利文献1)。但是，木霉的分解代谢物阻遏的机理还有很多不清楚的地方，没有达到避免阻遏。

另外，在利用微生物的酶等蛋白质的生产中，除碳源之外，有时需要诱导物质。例如，米曲霉的α淀粉酶基因的表达由淀粉或麦芽糖等诱导。另外，木霉的主要的纤维素酶基因cbh1、cbh2、egl1和egl2的表达受纤维素、纤维二糖等诱导(非专利文献2)。淀粉或麦芽糖、纤维素、纤维二糖另外也可以作为培养的碳源使用。在使用微生物的纤维素酶生产中，通常使用阿维散(Avicel)等微晶性纤维素。

在专利文献3中，公开有代替纯粹的纤维素而将木质纤维素用作诱导物质的利用微生物的纤维素酶的制造方法。在专利文献3中，在含有纤维素系材料的培养基中，一边分别流加作为碳源的葡萄糖和作为pH调节剂的磷酸或氨水，一边对木霉进行培养，生产纤维素酶。在非专利文献3中公开有：一边在培养基中反复或持续地流加糖类，一边使棒状杆菌制造氨基酸。在专利文献4和非专利文献4中公开有：在培养物中流加葡萄糖和氨的混合溶液，通过一边控制pH值，一边加入碳源和氮源而发酵生产赖氨酸，通过该方法，赖氨酸的生产率增加。

糖基胺为C-1位的羟基被氨基取代的单糖衍生物，许多情况下，作为各种糖衍生物的中间体被合成并被利用。报道有β-D-糖基胺作为β-糖苷酶的抑制剂起作用(非专利文献5)。在非专利文献6中记载有β-D-糖基胺通过葡萄糖和氨的反应而生成。在非专利文献7中记载有：含有β-D-吡喃葡萄糖胺的各种D-葡萄糖衍生物可以作为用于白色假丝酵母(Candida albicans)的菌丝生长的碳源利用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2015-39349号公报

专利文献2：日本特表平11-512930号公报

专利文献3：美国专利公开公报第2008/0199908号

专利文献4：中国专利授权公报第101967501号

非专利文献

非专利文献1：Appl.Environ.Microbiol.,63:1298-1306(1997)

非专利文献2：Curr.Genomics,14:230-249(2013)

非专利文献3：Journal of Biotechnology,104:155-172(2003)

非专利文献4：The Chinese Journal of Process Engineering,11(3):492-496(2011)

非专利文献5：Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.,48:319-384(1990)