[发明专利]用包含NC-1-Fc的蛋白寡聚体治疗血管发生、纤维化和癌症相关疾病的手段和方法

权利要求书

1.生产包含至少两个，且优选三个异源二聚体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体的方法，所述方法包括：

a)在允许形成包含至少两个，且优选三个异源二聚体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体的条件下，培养表达(i)和(ii)的宿主细胞，所述(i)为融合蛋白，其从N-至C-端包含融合至具有“杵”突变的人IgG1 Fc的来自胶原蛋白18的人NC-1，或融合至来自胶原蛋白18的人NC-1的具有“杵”突变的人IgG1 Fc，所述(ii)为具有“臼”突变的人IgG1 Fc，其中(i)所述的融合蛋白和(ii)所述的具有“臼”突变的人IgG1 Fc以2∶1或更高的比例表达，以及

b)从步骤a)的所述宿主细胞中获得包含至少两个，且优选三个异源二聚体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体。

2.权利要求1所述的方法，其进一步包括步骤c)，其中三聚体的形成通过交联非变性的异源二聚体人NC-1-Fc蛋白来测试。

3.权利要求1或2所述的方法，其中人IgG1 Fc包含“杵”突变S354C/T366W，和具有“臼”突变Y349C/T366S/L368A/Y407V的人IgG1 Fc。

4.权利要求1、2或3所述的方法，其中具有“杵”突变S354C/T366W的人IgG1 Fc包含SEQID NO:25，且具有“臼”突变Y349C/T366S/L368A/Y407V的人IgG1 Fc包含SEQ ID NO:26。

5.生产包含至少两个，且优选三个单体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体的方法，所述方法包括：

a)在允许形成包含至少两个，且优选三个单体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体的条件下，培养表达融合蛋白的宿主细胞，所述融合蛋白从N-至C-端包含融合至人IgG1 Fc的来自胶原蛋白18的人NC-1，或融合至来自胶原蛋白18的人NC-1的人IgG1 Fc，其中所述人IgG1 Fc包含至少一个单体突变，优选地单体突变F405R，和一个或更多个半衰期延长突变，优选半衰期延长突变M252Y、S254T和T256E，以及

b)从步骤a)的所述宿主细胞中获得包含至少两个，且优选三个单体人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚体。

6.蛋白寡聚体，其包含至少两个，且优选三个异源二聚体人NC-1-Fc蛋白，所述蛋白寡聚体用于治疗、改善或预防血管发生相关疾病，其中所述异源二聚体人NC-1-Fc蛋白包含(i)融合蛋白，其从N-至C-端包含融合至具有“杵”突变的人IgG1 Fc的来自胶原蛋白18的人NC-1，或融合至来自胶原蛋白18的人NC-1的人IgG1 Fc，和(ii)具有“臼”突变的人IgG1 Fc，其中人IgG1 Fc中的所述“杵”突变和“臼”突变如权利要求3或4中定义。

7.如权利要求6所述用途的蛋白寡聚体，其中所述血管发生相关疾病选自由以下各项组成的组：血管发生依赖性癌症，包括实体瘤，黑素瘤，肿瘤转移瘤，血源性肿瘤，如白血病，良性肿瘤，如血管瘤，听神经瘤，神经纤维瘤，沙眼，化脓性肉芽肿；类风湿性关节炎；银屑病；眼部血管发生疾病如糖尿病性视网膜病变，早产儿视网膜病变，黄斑变性，角膜移植片排斥，新生血管性青光眼，晶状体后纤维组织形成，发红(rubeosis)；Osler-Webber综合征；心肌血管发生；斑块新血管形成；毛细管扩张；血友病关节；血管纤维瘤；伤口肉芽；过度或异常刺激内皮细胞的疾病如肠粘连，动脉粥样硬化，硬皮病，肥大性疤痕(疤痕疙瘩)；具有血管发生作为病理结果的疾病，例如猫抓病(Rochele minalia quintosa)和溃疡(幽门螺杆菌)。

8.单体NC-1-Fc蛋白，其包含来自胶原蛋白18的人NC-1和来自人IgG1的Fc结构域，其中来自人IgG1的Fc结构域包含至少一个单体突变，优选地单体突变F405R，和一个或更多个半衰期延长突变，优选半衰期延长突变M252Y、S254T和T256E。