[发明专利]将核酸递送至耳蜗和前庭细胞的组合物和方法

说明书

本文提供将核酸有效地递送至耳蜗和前庭细胞的材料和方法，以及治疗与基因缺陷相关的感觉转导障碍的方法。

相关申请的交叉引用

本申请主张2018年3月5日提交的下述美国临时申请62/638,697的权益，该临时申请的整体内容通过引用并入本文。

背景技术

遗传性听力损失是一个显著的问题，且鲜有除耳蜗植入以外的治疗选择。先天性听力问题往往由单基因缺陷造成。每500个婴儿中就诊断出1例语前聋，其中大约50％具有遗传病因。乌谢尔综合征(Usher syndrome)与大量不同的临床亚型相关，每一种亚型均可由大量不同基因中任一个的突变造成，乌谢尔综合征是3％至6％的儿童早期耳聋的原因。一种更普遍的基因缺陷出现在TMC1基因中，估计占所有遗传性耳聋的1％至2％。最严重的乌谢尔综合征形式，USH1，与下述六种基因的缺陷相关：USH1、MYO7A(肌球蛋白(myosin)7a)、USH1C(harmonin)、CDH23(钙粘蛋白(cadherin 23)、PCDH15(原钙粘蛋白(protocadherin)15)、SANS(sans；也称为USH1G)和CIB2(钙整合素结合蛋白2)。

内耳，例如耳蜗，尤其是耳蜗中的内毛细胞和外毛细胞(IHC和OHC)，对于用以干预多种病因的听力损失和耳聋、最直接的单基因形式的先天性耳聋的多核苷酸治疗途径来说，是有吸引力的目标。但是，有效地以IHC和OHC及其它可能与基因治疗途径相关的内耳细胞为靶标并转导这些细胞是一个挑战。

发明内容

本发明提供AAV9-php.b载体，该载体包含编码所关注的多肽(例如，TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b、或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B)的转基因，以及将该载体给药至听力和/或前庭机械感受中具有基因缺陷的受试者的内耳从而治疗该受试者的方法。

本发明至少部分地基于下述发现：AAV9-php.b-CMV-GFP(也称为AAV-php.b-CMV-GFP)在体内有效且特异性地以内耳的感觉细胞包括内毛细胞和外毛细胞为靶标。

一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体含有编码肌球蛋白7a、harmonin(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、钙粘蛋白23、原钙粘蛋白15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS和钙整合素结合蛋白2的多核苷酸或本文所述的任何其它多肽。

另一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体编码与AAV9-php.b具有至少约85％序列一致性的衣壳，且含有引导人TMC1多核苷酸的表达的启动子。

另一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体含有引导下游多核苷酸的表达的启动子，该启动子为Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子或TMHS(LHFPL5)启动子。

另一方面，本发明提供含有前述方面的AAV9-php.b载体的细胞。

另一方面，本发明提供表达受试者的内耳中的多肽的方法，该方法涉及令内耳细胞与编码所关注多肽的AAV9-php.b载体接触，其中该AAV9-php.b载体转染至少约85％、90％、95％或更多的内毛细胞或外毛细胞。