[发明专利]用于稳定核酸-核苷酸-聚合酶复合物的方法和组合物在审
| 申请号： | 201980027733.5 | 申请日： | 2019-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN112567047A | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 法比安·布洛克;莫拉萨·莫希尼·米德尔顿;马克·C·瓦伦;皮纳尔·伊多根;迈克尔·詹姆斯·施密特;布列塔尼·A·罗曼;刘颖琳;阿诺德·奥利芬特 | 申请（专利权）人： | 欧姆尼欧美公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人： | 王达佐;洪欣 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 稳定 核酸 核苷酸 聚合 复合物 方法 组合 | ||
1.一种检测引发的模板核酸的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)提供包含三元复合物的混合物，所述三元复合物包括引发的模板核酸、聚合酶和所述引发的模板核酸的下一个碱基的核苷酸同源物，
其中所述混合物还包含过量的存在于所述三元复合物中的相同类型的核苷酸；
(b)用含有Li+的流体替换所述过量的核苷酸；以及
(c)当所述三元复合物与所述含有Li+的流体接触时，检测所述三元复合物。
2.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括(d)根据步骤(c)的结果鉴定所述引发的模板核酸分子的下一个正确碱基。
3.如权利要求2所述的方法，所述方法还包括(e)延伸引发的模板核酸的引物。
4.如权利要求3所述的方法，其中通过添加包含可逆终止子部分的核苷酸来延伸所述引物。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述引发的模板的引物包含可逆终止子部分。
6.如权利要求5所述的方法，所述方法还包括(e)修饰或去除所述可逆终止子部分以对所述引物解封闭。
7.如权利要求6所述的方法，所述方法还包括(f)延伸所述解封闭的引物。
8.如权利要求7所述的方法，其中通过添加包含可逆终止子部分的核苷酸来延伸所述解封闭的引物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中将所述三元复合物固定在固体载体上。
10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述核苷酸同源物包含在步骤(c)中检测的外源标记物。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述混合物包含怀疑存在于所述模板核酸中的至少两种不同的碱基类型的核苷酸同源物。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述不同碱基类型的所述核苷酸同源物分别包含不同的外源标记物。
13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述聚合酶包含在步骤(c)中检测的外源标记物。
14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述混合物还包含存在于所述三元复合物中的过量的相同类型的聚合酶。
15.如权利要求14所述的方法，其中步骤(c)包括用所述含有Li+的流体替换所述过量的聚合酶和所述过量的核苷酸。
16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述过量的核苷酸可溶于所述流体中。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中步骤(b)包括向所述三元复合物递送包含Li+并且缺乏存在于所述三元复合物中的所述类型的核苷酸的流体，从而用所述流体替换所述过量的核苷酸。
18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中所述Li+以1mM与100mM之间的浓度存在。
19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述流体还包含甜菜碱。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述流体还包含聚乙烯亚胺。
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