[发明专利]内皮细胞因子及其方法

说明书

本文所述的技术涉及产生内皮龛细胞的组合物和方法。本文所述技术的实施方案包括与产生或工程化内皮龛细胞相关的组合物、试剂盒、载体和方法。一方面包括产生/工程化内皮龛细胞的方法，其包括在内皮细胞中表达一种或多种转录因子，其中所述一种或多种转录因子来自Ets家族、Sox家族和/或核激素(NHR)家族。

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C§119(e)要求2018年3月23日提交的美国临时申请第62/647,433号的优先权，其内容以其整体并入本文中。

政府支持

本发明是在国立卫生研究院授予的资助号DK111790和HL048801 下，由政府支持作出的。政府享有本发明的某些权利。

序列表

本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式提交的序列表，并且以其整体在此并入。在2019年3月22日创建的所述ASCII副本被命名为 701039-091810-seq_ST25.txt，大小为32536字节。

技术领域

本文所述的技术涉及产生内皮龛细胞的组合物和方法。

背景

造血干细胞和祖细胞(HSPC)是移植后能够重建整个血液系统的罕见细胞群。作为骨髓移植物的功能单位，这些细胞为许多血液和免疫疾病提供了有效性治疗。不幸的是，移植对于许多个体，特别是那些缺乏免疫匹配供体的个体，不是可行的治疗选择。血液学研究的长期目标是在体外培养和扩增用于移植和/或遗传修饰的HSPC。尽管脐带血来源的 HSPC在体外扩增方面有一定程度的适应性，但在没有龛信号的情况下维持和诱导成体来源的HSPC的自我更新已被证明是具有挑战性的。

在试图概述体内支持HSPC的微环境或“龛”的方面，针对体外扩增的策略具有与支持细胞共培养的HSPC。在成体的骨髓中，认为多种细胞类型均包括HSPC龛，其中主要的贡献因子是内皮细胞(EC)和血管周间充质基质细胞。骨髓中不同内皮细胞亚型可差异调节HSPC稳态。动脉EC(AEC)的渗透性较低并且被认为促进HSPC静止，而血窦EC(SEC) 是渗漏的并且支持HSPC的分化和动员。此外，在骨髓抑制后的造血恢复期间，EC在多谱系造血的龛再造和重建中起关键作用。在胚胎发育期间和在诱导诸如肝脏、脾和头骨的组织中的髓外造血的应激条件下， HSPC也可被支持在骨髓外。如在骨髓中一样，认为EC在这些组织中作为HSPC龛的关键核心成分发挥作用。

研究人员集中于这样的体外培养物的开发，其中HSPC可以在实验室中与支持用于随后在移植中使用的HSPC的维持或扩增的其它细胞类型一起生长。然而，迄今为止，这些体外培养物仅仅是适度成功的。

概述

在斑马鱼胚胎的血管HSPC龛的研究中，研究了在内源性龛内皮细胞中正常表达的转录因子(来自Ets、Sox和核激素家族)的组合。当这些相同转录因子的人直系同源物被异位表达时，在斑马鱼胚胎中产生异位血管龛，HSPC被募集和维持在该异位血管龛处。

作为将这些发现转化成临床应用的步骤，转录因子(其最初在斑马鱼研究中鉴定)可以在人内皮细胞中表达，以将这些细胞重新编程成HSPC 龛样身份。这些龛内皮细胞可用于与HSPC共培养，以扩大HSPC数量或延长培养时间，用于随后的移植。

例如，已知结合Ets、Sox和核激素基序的转录因子可以在龛内皮细胞中表达。在Ets家族中，这些因子包括etv2、fli1a和Ets1；其中相应的人因子是ETV2、FLI1和ETS1。在Sox家族中，这些转录因子包括sox18 和sox7；其中相应的人因子是SOX7和SOX18。在核激素家族中，这些转录因子包括rxraa和nr2f2；其中相应的人因子是RXRA和NR2R2。