[发明专利]使用WNT激动剂和生物活性脂质用于生成和扩增心肌细胞的试剂和方法

权利要求书

1.一种用于扩增搏动的心肌细胞的方法，所述方法包括用WNT激动剂、生物活性脂质和/或WNT激动剂与生物活性脂质的组合处理搏动的心肌细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述搏动的心肌细胞是人心肌细胞。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述处理在体外进行。

4.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在处理搏动的心肌细胞的步骤之前，将多能干细胞分化为搏动的心肌细胞的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞、间充质干细胞、心肌祖细胞和/或诱导多能干(iPS)细胞。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是GSK3β抑制剂。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述生物活性脂质是鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和/或溶血磷脂酸(LPA)。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是CHIR99021。

9.根据权利要求1-5或7中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是CHIR99021、BIO、Wnt3A、Wnt3A+R-spondin、Wnt替代物ScFv-DKK1c、ScFv-DKK1c+R-spondin和/或其任何组合。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在1天至120天的时间内处理所述搏动的心肌细胞。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中通过将所述WNT激动剂和/或生物脂质添加至组织培养基中来处理所述搏动的心肌细胞，其中对于每种生物活性脂质以1至50μM的终浓度、对于CHIR99021或BIO以1至50μM的终浓度、以及对于重组WNT激动剂Wnt3A、Wnt3A+R-spondin、Wnt替代物ScFv-DKK1c、ScFv-DKK1c+R-spondin和/或其任何组合以1至500ng/mL的终浓度添加至组织培养基中。

12.一种从多能干细胞产生搏动的心肌细胞的方法，所述方法包括：

用至少一种生物活性脂质和至少一种WNT激动剂处理多能干细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述多能干细胞是人细胞。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞、间充质干细胞、心肌祖细胞和/或诱导性多能干(iPS)细胞。

15.根据权利要求12-14中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是GSK3β抑制剂。

16.根据权利要求12-15中任一项所述的方法，其中所述生物活性脂质是鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和/或溶血磷脂酸(LPA)。

17.根据权利要求12-16中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是CHIR99021。

18.根据权利要求12-16中任一项所述的方法，其中所述WNT激动剂是CHIR99021、BIO、Wnt3A、Wnt3A+R-spondin、Wnt替代物ScFv-DKK1c、ScFv-DKK1c+R-spondin和/或其任何组合。

19.根据权利要求12-18中任一项所述的方法，其中在1小时至10天的时间内处理所述多能干细胞。