[发明专利]检测MAGEA4的方法

说明书

本发明涉及检测样品中的MAGEA4方法。该方法包括：以范围从2μg/ml至20μg/ml的浓度向样品添加抗MAGEA4抗体；孵育抗体和样品；以及检测与样品结合的抗体。本发明的方法可用于诊断对象是否患有癌症以及对象是否有资格用靶向MAGEA4的癌症疗法进行治疗。

技术领域

本发明涉及用于检测黑素瘤相关抗原A4(MAGEA4)的方法。本发明的方法可用于诊断对象是否患有癌症以及对象是否有资格用靶向MAGEA4的癌症疗法进行治疗。

背景技术

MAGEA4(NCBI参考序列：NP_001011550.1)是属于种系编码的癌症抗原中的MAGE家族的肿瘤相关抗原(TAA)(De Plaen,et al.,(1994),Immunogenetics 40(5):360-369)，并且是治疗干预的理想目标。据报道，MAGEA4在多种类型的肿瘤中高水平表达，包括黑色素瘤、食道癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌和膀胱癌(Bergeron,(2009),Int J Cancer 125(6):1365-1371；Cabezon,et al.,(2013),Mol Cell Proteomics 12(2):381-394；Cuffel,etal.,(2011),Int J Cancer 128(11):2625-2634；Forghanifard,et al.,(2011),CancerBiol Ther 12(3):191-197；Karimi,et al.,(2012),Clin Lung Cancer 13(3):214-219；Svobodova,et al.,(2011),Eur J Cancer 47(3):460-469)。MAGEA4在正常组织中的表达限于成人睾丸和包括胎盘在内的其他免疫豁免部位。因此，在其他组织中检测到MAGEA4是癌症的指示，并可用于建议癌症靶向疗法。

癌症靶向疗法旨在与参与癌症的生长、演进或扩散的分子特异性相互作用。近年来，已批准或在临床测试中的此类治疗的数量已显著增加。与该增加同时出现的是，对能够鉴别出最有可能从特定疗法中受益的那些患者的合适伴随诊断方法的要求也在增加。

对于旨在特异性识别肿瘤相关抗原(TAA)(诸如MAGEA4)的疗法，检测患者肿瘤样品中给定TAA的表达提供了一种方便的诊断方法，以将患者分类为可能的反应者并因此有资格使用相应的疗法进行治疗。虽然可应用于检测TAA的已知技术有许多，但获得准确并且可再现的伴随诊断测定并非易事，并且需要仔细优化。假阴性结果可能意味着不会向患者提供潜在的有益治疗，而假阳性结果可能导致对该患者产生不必要的、潜在的毒性副作用。因此，仍然持续需要在治疗前检测TAA、诊断癌症并鉴别符合条件的患者的诊断方法。

免疫组织化学(IHC)是一种众所周知的诊断方法。可使用自动染色系统执行IHC。这样的系统使标准化和提高可再现性成为可能。自动染色系统可从包括Ventana/Roche、Dako/Agilent、Leica ThemoFisher在内的许多供应商处通过商业获得。与其他方法(诸如PCR)不同，IHC可提供细胞定位以及表达水平的信息。这对于其中抗原表达可能是异质的肿瘤样品特别重要。FDA批准的Herceptest(Agilent-Dako)被认为是针对靶向疗法的基于IHC的伴随诊断测定的原型。在该情况下，测试阳性则将患者分类为对乳腺癌的Her2靶向抗体曲妥珠单抗(赫赛汀)的“反应者”。最近的示例是针对非小细胞肺癌中的PD-L1抗体pembrolizumab的IHC诊断测定(Roach et al.,(2016),Appl.Immunohistochem.Mol.Morphol.24(6):392-397)。尽管IHC作为一种诊断方法已被广泛接受，但仍存在可再现性、缺乏标准化以及试剂、检测系统和测定条件过多的问题(Taylor et al.,(2014),Appl.Immunohistochem.Mol.Morphol.22(8):555-561)，所有这些问题使得诊断测定的发展与常规化相去甚远。

发明内容

在第一方面，本发明提供检测样品中的MAGEA4的方法，该方法包括：